摘要
目的：胃癌（Gastric cancer, GC）是世界上肿瘤相关性死亡的主要原因之一，而调节性T细胞（Treg cells）被认为是抑制抗肿瘤免疫促进肿瘤免疫耐受的主要因素之一。以往有关Treg细胞与胃癌的研究结果存在争议，现已发现Treg细胞是一类具有异质性的T细胞亚群,存在表型和功能的不同，这可能是导致之前结果不一致的原因。而目前鲜有关于这类Treg亚群细胞与胃癌的研究报道，因此本次研究通过检测胃癌患者外周血以及肿瘤组织中Treg细胞及亚群的表达，探索Treg细胞及亚群与胃癌患者各临床参数的相关性。 方法：搜集胃癌患者和健康对照组外周血、同一患者的胃癌组织和癌旁正常组织，制备、分离、提纯单个核细胞，标记表面抗体CD3、CD4、CD45RA、CD25和核内抗体Foxp3。再根据CD45RA和Foxp3的表达将Treg细胞分为CD45RA+Foxp3lo（rTreg），CD45RA-Foxp3hi（aTreg）和 CD45RA-Foxp3lo（non-Treg）三种亚群。流式细胞仪检测分析各个组Treg及亚群细胞占CD4+细胞的比例。Graph Pad Prism统计软件（5.0版本）统计分析数据，Kruskal-wallis检验（多组）、Mann-Whitney U检验（两组）比较各组间的差异是否具有统计学意义。 结果：胃癌患者外周血（GC-PBMC）及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中总的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞比例要比健康对照组（HD-PBMC）和癌旁正常组织浸润淋巴细胞（NIL）的明显增加（P＜0.0001，P＜0.0001），其差异有统计学意义。在外周血中胃癌患者的aTreg和non-Treg细胞比例较健康对照组明显增加（P＜0.0001,P＜0.0001），差异有统计学意义。在组织浸润淋巴细胞中，TIL-aTreg和TIL-non-Treg细胞比例较NIL明显增加（P＜0.0001,P＜0.001）。分析 Treg细胞及其亚群与各临床病理参数关系发现，仅发现肿瘤转移（淋巴转移和远处转移）与Treg及亚群细胞相关，而与肿瘤位置、大小、分化程度、分期以及血清CEA浓度无明显相关性。出现转移者无论在PBMC还是TIL中总的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞所占比例均较无转移者明显增加（P＜0.05，P＜0.01），亚群细胞中只有转移患者 TIL中的aTreg细胞所占比例较无转移者明显增加（P＜0.01）。 结论：我们的研究证实了在胃癌患者外周血和TIL中Treg细胞所占比例明显增加，以aTreg细胞增加最为明显。而且只有TIL中增加的aTreg细胞与肿瘤转移有关，提示在肿瘤微环境中起主要抑制抗肿瘤免疫的是TIL中的aTreg细胞，促使疾病的进展。所以在今后的免疫靶向治疗中，局部地选择性消除这类亚群细胞而非消除其他亚群细胞和（或）全身性的消除整个Treg细胞将有望成为一项有效治疗胃癌的手段。同时我们还发现胃癌患者外周血及TIL中的non-Treg细胞也是增加的，但与疾病无明显关联，所以在以后的研究中，我们需要鉴别不同的Treg亚型细胞而非整个 Treg细胞与肿瘤的关系，这样才有可能得出更为准确的结果。
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