摘要
目的：制备cRGD修饰的载Fe3O4靶向血栓的MR分子探针（即Fe3O4-PLGA-cRGD纳米粒），并对其理化性质、生物毒性、体内分布、体内外靶向血栓能力及体内MR显像能力进行验证。 方法：采用双乳化溶剂挥发法（水/油/水，W/O/W）以端羧基聚乳酸羟基乙酸（PLGA-COOH）及Fe3O4为壳材料，制备出Fe3O4-PLGA纳米粒，采用碳二亚胺法将环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽段（cyclic arginine-glycine-aspartic, cRGD）连接于Fe3O4-PLGA纳米粒表面，制备 Fe3O4-PLGA-cRGD纳米粒。光学显微镜观察纳米粒的形态、表面及分散性，透射电镜观察纳米粒的内部结构，激光粒度仪对纳米粒的粒径、多分散系数（polydispersity index, PDI）和 Zeta电位进行检测。cRGD采用异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate, FITC）标记，激光共聚焦显微镜观察纳米粒表面 cRGD的连接，流式细胞仪测定cRGD的携带率。原子吸收光谱法测定Fe3O4的携带率。通过分析SD大鼠的肝肾功、血细胞分析及观察主要脏器病理切片来评价纳米粒的体内毒性。离体血栓冰冻切片证实纳米粒对离体血栓的靶向能力。7.0 T MR扫描仪观察SD大鼠腹主动脉非闭塞性附壁血栓构建情况、纳米粒在 SD大鼠体内的分布以及体内靶向血栓显像的情况，并结合病理切片验证腹主动脉非闭塞性附壁血栓的形成、纳米粒体内靶向血栓的能力。 结果：Fe3O4-PLGA-cRGD纳米粒构建成功，轮廓规则呈球形，分散性好，表面光滑，大小较均一，平均粒径为368.2±4.5 nm，PDI为0.081±0.058，Zeta电位为-9.43±0.86 mV，透射电镜下见 Fe3O4黑色小颗粒较均匀分布于纳米粒壳上。激光共聚焦显微镜观察Fe3O4-PLGA-cRGD纳米粒呈绿色环状荧光，表明 cRGD成功连接于纳米粒表面，流式细胞仪测得cRGD携带率为99.93±0.06%。原子吸收光谱法测得Fe3O4携带率为64.67±0.9%。SD大鼠肝肾功、血细胞分析及病理切片结果提示纳米粒没有明显体内毒性作用。靶向离体血栓冰冻切片见大量 Fe3O4-PLGA-cRGD纳米粒粘附于血栓表面及血管内皮下。纳米粒体内分布实验可观察到注射纳米粒之后肝脾 T2信号明显降低，肝脾信噪比明显低于注射前，而肾脏信噪比较注射前有轻微降低，提示纳米粒主要被肝脾吞噬，少许可能经肾脏代谢。体内靶向血栓实验结果显示 SD大鼠腹主动脉非闭塞附壁血栓构建成功，注射Fe3O4-PLGA-cRGD纳米粒之后10 min腹主动脉周围信号明显降低，并随时间逐渐增加直到50 min，病理切片观察到纳米粒附着在血栓表面以及血管内皮下，说明纳米粒具有较好的体内靶向血栓能力及良好的磁共振显像效果。 结论：Fe3O4-PLGA-cRGD纳米粒构建成功，轮廓规则并大小适宜，cRGD及 Fe3O4携带率较高，没有明显体内毒性，对离体血栓和体内血栓均具有良好的靶向性，同时具备良好的 MR负性对比增强效应，有望成为早期诊断血栓的一种高效、敏感、特异的磁共振对比剂。
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