摘要
目的：法尼脂 X受体是一种配体依赖的转录因子，在调节胆汁酸代谢中发挥重要作用。本实验的目的是探讨新型法尼脂X受体激动剂--奥贝胆酸在四氯化碳诱导急性肝损伤中的保护作用及部分机制。 方法：6-8周雄性CD-1小鼠（28-30g）48只，随机分为8组（每组6只），即CCl4-0h组(即对照组），CCl4-12h组，CCl4-24h组，CCl4-48h组；OCA+CCl4-0h组（即OCA组），OCA+CCl4-12h组，OCA+CCl4-24h组，OCA+CCl4-48h组。在CCl4-12h、24h、48h组中，给予小鼠单次腹腔注射CCl4（0.15 ml/kg，与橄榄油1:10混合），给药剂量参照课题组既往试验研究[1]；在CCl4-0h组中，给予腹腔注射相同剂量的PBS；在OCA+CCl4-12h、24h、48h组中，所有小鼠在给予腹腔注射CCl4（0.15 ml/kg）前1h，12h，24h分别经灌胃给药(OCA，5 mg/kg,溶于PBS中)，OCA与CCl4剂量参照相关研究[2.3]；OCA+CCl4-0h组中给予小鼠腹腔注射橄榄油前1h，12h，24h分别经灌胃给药(OCA，5 mg/kg）。所有小鼠经腹腔注射CCl4后分别在0,12,24和48 h麻醉后处死。称量小鼠及肝脏重量；收集血清用于检测生化指标；部分肝脏组织迅速放入液氮速冻后于-80℃储存，用RT-PCR方法检测相关炎症基因的表达，用 WB方法检测相关蛋白质的表达；另一部分肝脏组织使用4%的多聚甲醛固定后用于组织学检查，H&E染色观察肝脏组织坏死及炎症，TUNEL观察肝脏组织凋亡。 结果：经过OCA预处理的小鼠肝脏核蛋白FXR的水平明显升高，表明OCA能够激活FXR。（1）OCA预处理对小鼠肝重的影响：小鼠肝重及肝系数在给予CCl412h后开始升高并持续至48h；OCA预处理后，小鼠肝重及肝系数明显降低。（2） OCA预处理在CCl4诱导的急性肝损伤中的作用：CCl4处理后12h小鼠血清ALT开始轻微升高，24h升高最显著，48h仍有升高；而 OCA预处理后，血清 ALT较单纯CCl4组明显降低；CCl4组中肝脏坏死面积在12h、24h、48h分别为22%、46%、26%，但在相应的OCA预处理组，肝脏坏死面积显著减少。（3）OCA预处理抑制CCl4诱导的肝细胞凋亡：在CCl4组中，12h组可见少量肝细胞凋亡，24h组凋亡最明显；OCA预处理后可显著减少肝细胞凋亡。（4）OCA在 CCl4诱导的急性肝损伤中可以不同程度调控肝脏促炎因子、抗炎因子、趋化因子等相关炎症因子基因的表达：在给予CCl412h后TNF-α和 Il-1β两种促炎细胞因子mRNA水平较对照组明显升高，抗炎因子-IL-4表达轻微上调，Mcp-1, Mip-2和 Kc三种细胞趋化因子表达明显升高；OCA预处理后，促炎因子及细胞趋化因子较 CCl4组表达明显下降，抗炎因子表达明显升高。（5）OCA预处理可抑制CCl4急性肝损伤中肝脏 NF-κB信号通路的激活：肝脏胞浆pIκB在给予CCl412h后开始明显升高，与之相对应的胞核中的NF-κB p65和 p50两个亚基明显升高；而在OCA预处理组胞浆中 IκB磷酸化较CCl4组明显减少，胞核中NF-κB p65和 p50两个亚基明显下降。（6）OCA预处理可抑制 CCl4急性肝损伤中肝脏 AKT, ERK和p38的磷酸化：肝脏pAKT水平在所有时点较对照组均明显升高，但OCA预处理后 AKT的磷酸化明显减少；pERK水平在给予CCl4后12h开始升高并持续至24h，pp38水平在给予 CCl4后12h开始升高持续至48h；OCA预处理明显抑制ERK和 p38的磷酸化。 结论：OCA保护CCl4诱导的肝细胞坏死及凋亡。OCA选择性下调CCl4急性肝损伤中肝脏炎性趋化因子与促炎性细胞因子的表达，同时上调抗炎性细胞因子表达；OCA激活肝脏FXR信号，同时抑制CCl4所致的肝脏NF-κB信号通路的激活。本实验研究表明：FXR是肝脏炎症过程的重要调控因子。因此，OCA作为人工合成的FXR激动剂在急性肝损伤中发挥重要的保护作用。
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