摘要
目的： 探讨贯叶连翘提取物（Hypericum Perforatum Extract，HPE）对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的保护作用及部分机制研究。 方法： 48只Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为正常组、HPE单药组(HPE灌胃)、模型组(CCl4处理)、HPE高剂量组(CCl4+HPE100mg/kg)、HPE中剂量组(CCl4+HPE50mg/kg)和HPE低剂量组(CCl4+HPE25mg/kg)。采用50%CCl4-花生油造模，于大鼠背部皮下注射，每周2次，共12周，正常组及HPE单药组给予等量生理盐水皮下注射。造模第二天开始灌胃给予大鼠不同剂量HPE，HPE各剂量组分别按100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg大鼠体重给药，HPE单药组按50mg/kg大鼠体重给药，每日一次，连续12周。正常组自由饮水，模型组给予同HPE高剂量组灌胃剂量生理盐水灌胃。12周后处死大鼠，肝脾称重，计算肝脾指数；留取部分肝脏标本用于HE及Masson染色光镜下观察肝组织病理学变化；留取大鼠血清及肝组织匀浆标本，采用ELISA法检测外周血ALT、AST和TBIL含量，及肝组织HA、LN、CIV、PCⅢ含量。采用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测TGF-β1、α-SMA、pSmad2、pSmad3、Smad7在各组大鼠肝组织中蛋白表达，蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)法进行进一步验证。 结果： 模型组大鼠肝脾指数较正常组明显增加(P<0.01)，HPE(50,100mg/kg)给药组能够明显减低模型组中升高的肝脾指数(P<0.05,P<0.01)。正常组及HPE单药组中，HE染色和Masson染色镜下见大鼠肝细胞排列整齐，以中央静脉为中心呈放射状排列，肝小叶结构完整，大鼠肝脏基本无纤维增生，仅在少许主要血管周围见少许蓝色纤维；模型组中，HE染色和Masson染色可见肝细胞排列紊乱，结构改变，多数肝细胞肿胀，伴有炎性浸润及灶状坏死，可见假小叶形成，大量蓝色纤维增生，中心静脉处明显，可见纤维增生分割肝组织。结合肝脾指数及肝脏病理光镜下改变，大鼠肝纤维化模型建立成功。给药后，HPE(50,100mg/kg)剂量组肝脏病理改变较模型组明显改善，细胞肿胀、坏死较模型组明显好转，纤维增生较其明显减少。与正常组比较，HPE单药组血清ALT、AST、TBIL含量，肝组织中HA、LN、CIV、PCⅢ含量以及肝组织中TGF-β1、α-SMA、pSmad2、pSmad3、Smad7蛋白表达差异均无统计学意义；模型组血清ALT、AST、TBIL含量明显升高(P<0.01)，肝组织中HA、LN、CIV、PCⅢ含量明显升高(P<0.01)，肝组织中TGF-β1、α-SMA、pSmad2、pSmad3蛋白表达均显著升高，Smad7蛋白表达显著下降(P<0.01)。与模型组比较，HPE明显降低血清ALT、AST、TBIL含量(P<0.01)，显著降低肝组织中HA、LN、C IV、PCⅢ含量(P<0.01)，能够下调肝组织中TGF-β1、α-SMA、pSmad2、pSmad3蛋白表达，上调Smad7蛋白表达(P<0.01)。 结论： 预防性给予HPE可明显改善肝损伤，减轻肝脏病理损伤及纤维增生程度，发挥抗肝纤维化作用，影响TGFβ1/Smads信号通路中相关蛋白的表达，对大鼠肝纤维化有明显保护作用，机制可能与抑制TGFβ1/Smads信号传导通路有关。
NETL