摘要
毛竹（Phyllostachys edulis）是我国分布最广，种植面积最大，资源最多，开发利用最高的优良竹类植物。毛竹适合在湿润、高温、微酸性或中性土壤的地区生长。低温、干旱、黑暗等逆境会对毛竹的生长发育产生严重的影响，因此研究毛竹的抗逆机制具有重要意义。本文基于本实验室对毛竹抗逆基因PeMYB的研究，采用PCR扩增的方法对毛竹PeMYB启动子进行克隆，并进行生物信息学分析，以及该启动子全长的活性验证和5'端缺失的功能分析研究。研究结果如下: 1.采用PCR扩增的方法对毛竹PeMYB基因的启动子进行克隆，获得长度为1332bp的毛竹PeMYB基因的启动子序列PeMYBpro，基因编号为PH01000142。 2.运用PLANTCARE软件对PeMYBpro启动子序列进行生物信息学分析;结果显示PeMYBpro启动子序列中不仅包含MYB的核心元件;也含有大量与光、低温、干旱、脱落酸、茉莉酸、水杨酸、赤霉素等非生物胁迫有关的响应元件。 3.通过构建pCAMBIA1301-PeMYBpro启动子全长植物表达载体分析PeMYBpro启动子活性;在洋葱表皮中进行pCAMBIA1301-PeMYBpro的瞬时表达分析;GUS基因的活性染色表明PeMYBpro启动子具有诱导型启动子活性，且在低温、干旱、黑暗胁迫诱导下有较强的活性。 4.成功构建pCAMBIA1301-PMpro-P1、pCAMBIA1301-PMpro-P2、pCAMBIA1301-PMpro-P3、pCAMBIA1301-PMpro-P4四个5'缺失植物表达载体;瞬时表达分析后，分别对GUS基因进行活性染色分析和定量分析。结果显示:这4个片段都具有诱导型启动子得活性，启动子PeMYBpro在-1332～-1033bp之间并无与干旱、低温、黑暗三类胁迫密切相关的启动子元件;在-1032～-740bp之间存在大量与干旱胁迫有关的响应元件;在-450～-141bp之间存在能够响应低温胁迫的元件;在-1032～-740bp和-449～-141bp之间存在大量与光响应相关的启动子元件。
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