摘要
灰葡萄孢属病原菌（Bortytis）是世界排名第二真菌病害的病原，它具有腐生性强，寄主范围十分广泛等特点;由灰葡萄孢引起的灰霉病不仅是葡萄生产田中的常见病害，也是产后贮藏过程中的毁灭性病害。目前，国内外主要采用化学防治的方法来控制灰霉病，但随着杀菌剂的长时间和大剂量使用，灰霉菌已经对多种药剂产生了不同程度的抗药性，甚至多药抗性，因此，本研究对山东、湖北、黑龙江、山西、云南和辽宁6个省的主要葡萄产区灰霉菌进行了啶酰菌胺、多菌灵、腐霉利、咯菌腈、异菌脲和嘧霉胺的抗性检测，抑霉唑作用方式的探究，抑霉唑、福美双与其它6种主要杀菌剂之间的交互抗性关系，并建立了基于高通量测序技术的抗性分子检测方法用于快速检测葡萄灰霉病菌的抗药性。主要研究结果如下: 1.2016-2017年我国葡萄灰霉病菌对主要杀菌剂EC50的测定 试验在收集到的1494株葡萄灰霉病菌中随机选择120株葡萄灰霉病菌株，利用传统菌丝生长速率法测定灰霉菌株对多菌灵、腐霉利、异菌脲、咯菌腈、嘧霉胺、福美双的EC50和孢子萌发法测定灰霉菌株对啶酰菌胺的EC50，结果显示多菌灵的平均EC50最大，其对葡萄灰霉病菌的毒力最弱抗性最强，咯菌腈的平均EC50最小毒力最强。 2.2016-2017年我国葡萄灰霉病菌对主要杀菌剂的抗性检测 利用传统菌丝生长速率法和孢子萌发法对来自山东蓬莱、湖北荆州、黑龙江哈尔滨、山西太谷、云南宾川和辽宁北镇这6个省的主要葡萄产区共1494株灰霉菌进行了抗性检测。结果显示，山东蓬莱、湖北荆州、云南宾川、山西太谷地区中多菌灵、嘧霉胺、腐霉利和异菌脲的防效已经接近或完全丧失，而咯菌腈的依然较好;其次，山东蓬莱、湖北荆州、山西太谷地区葡萄灰霉病菌株全部为多抗类型，而黑龙江哈尔滨、云南太谷、辽宁北镇地区葡萄灰霉病菌有单抗类型且抗性频率较低。 3.抑霉唑的作用方式和抑霉唑、福美双与其它6种主要杀菌剂之间的交互抗性关系的探究 本研究探测了抑霉唑对灰霉菌的作用方式，及抑霉唑、福美双与其它6种杀菌剂之间的交互抗性关系。试验分别采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测抑霉唑对灰霉菌的EC50，研究表明菌丝生长速率法测定的平均EC50远远小于孢子萌发法作用方式下测得的，因此可以得出结论:抑霉唑对灰霉菌株的作用方式主要是抑制菌丝的生长。将已测得的这七类主要杀菌剂的lgEC50进行皮尔逊相关分析，得出抑霉唑、福美双与多菌灵、腐霉利、异菌脲、咯菌腈、嘧霉胺、啶酰菌胺的组合之间均不存在交互抗性的关系。 4.葡萄灰霉病菌对主要杀菌剂的抗药性高通量测序检测方法的建立 高通量测序技术与传统检测方法和其他分子检测技术相比具有高效、灵敏、便捷、低成本等显著优势，因此，本研究根据已知的葡萄灰霉病菌对主要杀菌剂的抗性突变位点，开发了高通量测序抗性检测技术。试验中探测了384株葡萄灰霉病菌株对多菌灵、腐霉利异菌脲、啶酰菌胺和MDR1（多药抗性类型1）的抗性情况且明确了多菌灵、啶酰菌胺、腐霉利异菌脲的抗性菌株的突变位点的频率。试验还在184株非多药抗性灰霉菌mrr1基因上检测出22个新的突变位点，推测这些新的突变位点可能是引起多药抗性的主要原因。因此，高通测序技术可以广泛运用于检测葡萄灰霉病菌抗性频率和抗性突变位点。
NETL