摘要
癌症是全世界高发病率和高死亡率的主要疾病。而目前，手术和化疗仍是癌症的主要治疗手段。手术风险性高，对人体造成的创伤较大，且往往会带来一系列的并发症。化学药物会给患者带来一些毒副作用，且容易产生多重耐药性，不利于后续治疗。因此，开发一类不具有常规化疗药物毒性、不受常见的化疗耐药机制影响的新型抗肿瘤药物成为当务之急。 与传统的化学治疗药物相比，多肽具有明显的优势。抗肿瘤多肽通常是作用于肿瘤细胞的细胞膜或者通过破坏线粒体膜诱导细胞凋亡而产生杀伤作用，因此能够克服细胞的多重耐药性。然而，抗肿瘤多肽也存在一些缺点与不足，如半衰期短、稳定性低、细胞选择性差等。因此就需要对多肽进行优化设计，以提高应用潜力。 本论文在抗肿瘤多肽上引入了靶向肽段RGDK，并采用前体药物策略引入过表达蛋白酶的特异性酶切位点，设计了一系列自组装抗肿瘤多肽，从而提高抗肿瘤多肽的靶向性与稳定性。 根据以上设计策略合成了多重靶向抗肿瘤多肽LIG系列，包括靶向肽段，连接肽段与功能肽段。其中，功能肽段是具有抗肿瘤活性的CL-1多肽(FLGALFRALSRLL)，靶向肽段是RGDK序列，引入的酶切位点PVGLIG位于连接肽段上，靶向过表达基质金属蛋白酶Ⅸ(MMP-9)。利用1，8-ANS荧光检测发现该系列的三个多肽在水环境中能够自组装;通过透射电镜观察它们可自组装形成纳米胶束;利用圆二色光谱(CD)测定它们在疏水环境中的二级结构均为α-螺旋，在水环境中，LIG-6和LIG-7的二级结构为无规卷曲，LIG-8的二级结构为α-螺旋;多肽LIG-8对MMP-9过表达的肿瘤细胞具有更强的细胞毒性，提示该多肽可能被MMP-9进一步激活;血清稳定性实验显示自组装多肽可以有效提高抗肿瘤多肽的稳定性;死活细胞染色实验显示多肽LIG-6、LIG-7和LIG-8对HeLa细胞的作用方式都是裂解细胞膜;将HeLa细胞注射裸鼠皮下建立移植瘤模型，并采用腹腔注射和瘤旁注射LIG-8进行干预，结果表明多肽LIG-8对肿瘤的生长具有明显的抑制作用。通过上述实验证明，设计的抗肿瘤多肽能有效杀死肿瘤细胞，具有多重靶向性，且血清稳定性较好，因此具有很好的抗肿瘤应用潜力。
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