摘要
目的： 炎症性肠病(IBD)是一类病因尚未完全阐明的慢性肠道非特异性炎症性疾病，主要包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)两个临床亚型。目前认为IBD主要是由遗传、免疫、环境、感染等因素共同作用于遗传易感者，使机体发生针对自身肠道菌群的异常免疫应答，最终导致肠组织出现难以控制的炎症反应。研究证实同型半胱氨酸(Hcy)不仅参与炎症过程，还在固有免疫和获得性免疫中发挥重要的调节作用。血清Hcy水平异常升高与系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病等自身免疫性疾病的发病密切相关。血清Hcy水平主要受亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、蛋氨酸合成酶(MTR)和蛋氨酸合成还原酶(MTRR)等限速酶影响；叶酸、维生素(Vit)B12也是影响Hcy代谢的重要营养因素。研究表明钴转运蛋白II(TCN2)基因多态性能调节VitB12的生物利用度，因此能间接影响Hcy代谢。我们的前期工作证实Hcy代谢相关酶MTHFR(rs1801133, rs1801131, rs2274976)、MTR(rs1805087)和MTRR(rs1801394)基因多态性与汉族人群UC易感性相关。本研究拟在浙江籍汉族人群中进一步探讨TCN2基因多态性及血清Hcy、叶酸和VitB12水平与IBD易感性的相关性，旨在为进一步揭示IBD的遗传免疫学发病机制提供线索。 第一部分：溃疡性结肠炎患者中TCN2基因多态性及血清Hcy、叶酸和VitB12水平分析。 方法： 收集397例UC患者和574名健康对照者，采用改良多重高温连接酶检测反应(iMLDR)技术检测 TCN2(rs1801198和 rs9606756)2种单核苷酸多态性(SNP)。从中随机选取128例UC患者和138名年龄、性别相匹配的健康对照者，采用循环酶法(ECA)检测血清Hcy水平，化学发光免疫法(CLIA)检测血清叶酸和VitB12水平。 结果： 与对照组相比较，UC组中上述2个SNP位点的突变等位基因和基因型频率无统计学差异(P均＞0.05)。分层分析发现，中重度UC患者中(rs1801198)的突变等位基因(G)和基因型(CG+GG)频率高于对照组(68.84%比56.10%, P＜0.001;90.95%比82.40%, P=0.005)；(rs9606756)的突变等位基因(G)和基因型(AG+GG)频率亦高于对照组(2.51%比1.05%, P=0.039;5.03%比2.09%, P=0.038)。采用Haploview4.2软件进行连锁不平衡和单倍型分析，结果显示(rs1801198)和(rs9606756)彼此连锁(D'=0.821, r2=0.007)，但所构建的4种单倍型的频率在UC组和对照组之间比较均无统计学差异(P均＞0.05)。UC组中Hcy平均水平高于对照组[(10.78±3.33)比(9.91±2.88)μmol/L, P=0.024]，而叶酸和VitB12平均水平低于对照组[(6.81±3.06)比(8.17±2.58) ng/mL, P＜0.001;(408.66±185.00)比(457.42±206.47) pg/mL, P=0.044]。UC组中高同型半胱氨酸血症(>15.0μmol/L, HHcy)、叶酸缺乏(<4.0 ng/mL)和VitB12缺乏(<203.0 pg/mL)所占比例均高于对照组(14.06%比4.35%, P=0.006;20.31%比5.07%, P＜0.001;14.06%比5.07%, P=0.012)。多元线性回归分析提示UC组中Hcy水平与VitB12、红细胞计数和白蛋白呈负相关(β=-0.404, P＜0.001;β=-0.314, P＜0.001;β=-0.245, P=0.003)，与Mayo评分和白细胞计数呈正相关(β=0.169, P=0.036;β=0.266, P=0.001)。Logistic回归分析显示HHcy和叶酸缺乏是UC的独立危险因素(OR=3.850, P=0.023;OR=4.611, P=0.001)。 小结： TCN2(rs1801198和rs9606756)基因多态性及血清Hcy、叶酸和VitB12水平与UC相关。浙江籍汉族UC患者中普遍存在HHcy、叶酸缺乏和VitB12缺乏，并且HHcy和叶酸缺乏是UC的独立危险因素。 第二部分：TCN2基因多态性及血清Hcy、叶酸和VitB12水平与克罗恩病的关系。 方法： 在307例CD患者和574名健康对照者中，采用iMLDR技术检测TCN2(rs1801198和rs9606756)基因多态性。从中随机选取88例CD患者和138名性别、年龄相匹配的健康对照者，采用ECA检测血清Hcy水平，CLIA检测血清叶酸和VitB12水平。 结果： CD组中(rs1801198)的突变等位基因(G)和基因型(CG+GG)频率与对照组相比差异无统计学意义(P均＞0.05)，但狭窄型CD患者中该SNP的突变等位基因(G)和基因型(CG+GG)频率高于对照组(65.75%比56.10%, P=0.027;93.15%比82.40%, P=0.025)。CD组中(rs9606756)的突变等位基因(G)和基因型(AG+GG)频率高于对照组(2.44%比1.05%, P=0.027;4.89%比2.09%, P=0.026)，狭窄型CD患者和回结肠型CD患者中(rs9606756)的突变等位基因(G)和基因型(AG+GG)频率亦均高于对照组(狭窄型CD/对照组:4.79%比1.05%, P=0.001;9.59%比2.09%, P=0.001;回结肠型CD/对照组:3.18%比1.05%, P=0.018;6.36%比2.09%, P=0.018)。TCN2(rs1801198和rs9606756)存在弱连锁不平衡(D'=0.735, r2=0.006)，CD组中(GG)单倍型频率高于对照组(2.23%比0.81%, P=0.012)。CD组中Hcy平均水平高于对照组[(11.51±6.07)比(9.91±2.88)μmol/L, P=0.023]，而叶酸和VitB12平均水平低于对照组[(6.08±2.90)比(8.17±2.58) ng/mL, P＜0.001;(319.30±126.87)比(457.42±206.47) pg/mL, P＜0.001]。CD组中HHcy、叶酸缺乏和VitB12缺乏的比例均高于对照组(18.18%比4.35%, P=0.001;27.27%比5.07%, P＜0.001;31.82%比5.07%, P＜0.001)。多元线性回归分析发现CD患者中Hcy水平与叶酸呈独立负相关(β=-0.494, P＜0.001)，与中性粒细胞百分比呈独立正相关(β=0.294, P=0.004)。Logistic回归分析提示叶酸缺乏和 VitB12缺乏为 CD的独立危险因素(OR=5.415, P＜0.001;OR=7.112, P＜0.001)。 小结： TCN2(rs1801198)突变可能影响狭窄型CD的发病风险，(rs9606756)可能与CD易感性相关。浙江籍汉族CD患者中普遍存在HHcy、叶酸缺乏和VitB12缺乏在，并且叶酸缺乏和VitB12缺乏为CD的独立危险因素。 结论： TCN2(rs1801198和rs9606756)基因多态性及血清Hcy、叶酸和VitB12水平与浙江籍汉族IBD的易感性密切相关。
NETL