摘要
目的：基于当前日臻成熟的青天葵组织培养技术，构建其扩繁体系，期望培育出的品种可代替野生资源作为药材的稳定来源之一，实现濒危植物青天葵药材资源的可持续利用。本课题从控制青天葵的污染并提出防治措施，同时对组培品、栽培品与野生品之间黄酮类成分组成比例分析比较等方面进行研究，为建立濒危植物青天葵扩繁体系及最终实现组织培养或人工栽培药材代替野生资源提供科学、详实的资料和依据，为进一步实现岭南道地药材青天葵的大规模产业化奠定基础。 方法：⑴查阅现有文献，通过综述已有的青天葵组织培养技术，结合实验室的实际条件，建立可循环的青天葵扩繁体系。总结在扩繁体系中遇到的污染问题，通过对污染的材料进行无菌水，生理盐水，升汞溶液，漂渍液，不同浓度次氯酸钠溶液的清洗效果比较研究，考察适宜的灭菌剂的浓度和时间。⑵以青天葵总黄酮含量为考察指标，通过对影响提取效果的溶剂浓度、溶剂量、提取时间、提取次数等四个主要因素进行正交设计试验，优化青天葵供试品提取工艺。通过正离子模式电喷雾质谱仪对不同生长方式青天葵的黄酮类成分进行分析，检测三者之间黄酮类成分组成比例是否有差异。⑶进行绿色、黄色、红色、蓝色四种不同光质光对青天葵的生长影响预实验；同时进行青天葵栽培品与野生品，不同阶段野生品之间的苯丙氨酸解氨酶（PAL）酶活力测定预实验。 结果：①被污染的青天葵组培物使用5%次氯酸钠溶液清洗10min后效果较好，不仅可基本抑制污染，植物材料仍能正常生长；升汞溶液虽可较彻底抑制污染，但对植物伤害较大，仅适用于对感染的球茎灭菌。②通过正交设计所得的较佳供试品提取工艺是用10倍量80%的乙醇加热回流提取2次，每次90min，所得的总黄酮含量较高。经质谱初步定性比较，野生品、栽培品与组培品所含的黄酮类成分比较相近，但组成比例有较大差别；其中野生品与组培品的相关成分组成比例相似。 结论：通过污染控制研究，能提高青天葵组织培养的成功率，尤其在进一步实现其规模化生产中极为有利。所得的黄酮类成分提取工艺可为青天葵扩繁体系的评价指标提供依据，对青天葵药材工业化大生产有一定的实际意义，也为进一步开发青天葵中总黄酮有效成分提供了较为科学合理的实验基础。人工栽培青天葵和组培得到的青天葵能否真正取代野生青天葵作为稳定的药材来源尚未有定论，仍需要进行相关的药理药效实验才能确定。
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