摘要
目的: 建立小鼠负重游泳模型，比较几种物质的抗疲劳效果，并从能量代谢、抗氧化功能及相关蛋白表达方面分析山葵树叶提取物抗疲劳效果的作用机制，为今后抗疲劳制剂的研发开辟新途。 方法: 1.几种物质抗疲劳效果的比较:选择麦芽糊精、人参叶提取物、山葵树叶对小鼠进行14d灌胃，小鼠尾部负重，负重重量为小鼠体重的2％，记录小鼠自下水至死亡的时间，作为抗疲劳效果的评价指标，维持游泳时间最长的实验组所干预的物质作为抗疲劳效果最佳的物质。分别灌胃山葵树叶水悬液(500mg/kg·bw、1000mg/kg·bw及2000mg/kg·bw)后进行负重游泳实验，由此通过优化得出最佳灌胃剂量，为后续山葵树叶醇提取及相关生化指标测定做准备。 2.山葵树叶提取物的提取及有效成分的初步分析:将新鲜山葵树叶洗净烘干、打碎过筛，以溶剂提取，过滤、真空浓缩、冷冻干燥得棕褐色粉末。以小鼠自下水至死亡的时间作为提取效果的“金标准”。采用FRAP法、福林酚法、铝离子显色法及苯酚-硫酸法测定山葵树叶提取物的总抗氧化力、总酚、植物类黄酮及多糖的含量;通过国际法急性毒性试验检测山葵树叶提取物的毒性。 3.山葵树叶提取物抗疲劳机制初步探讨:设置正常对照、游泳对照及提取物组(320mg/kg)对小鼠灌胃14d，游泳对照组及提取物组无负重游泳90min，取血及剪下小鼠肝、腓肠肌组织，用生理盐水冲洗、冰上均匀分装至冻存管内，液氮速冻后-40℃储存。分别对血浆中葡萄糖(Glu)含量、血浆中乳酸(Lac)含量、血浆中尿素氮(BUN)含量、血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)含量、血浆中游离脂肪酸(NEFA)含量;组织内的糖原、ATP酶活性、游离脂肪酸(NEFA)含量;血浆和组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性测定、丙二醛(MDA)含量测定、乳酸脱氢酶(LDH)活性测定、总抗氧化力(T-SOD)测定及过氧化氢酶(CAT)活性测定等能量代谢和抗氧化功能相关指标。以及采用酶联免疫（ELISA）法定量检测相关抗疲劳蛋白ORM1及转导介质CCR5的蛋白表达量。 结果: 1.通过记录小鼠下水至死亡时间，以空白组游泳时间为对照，得出山葵树叶组能够显著延长负重运动时间(P＜0.05)，且游泳时间长于人参叶提取物组及西洋参提取物组;在山葵树叶浓度梯度悬液对小鼠灌胃后抗运动疲劳实验中，得出中剂量组(1000mg/kg)能够较好的改善小鼠运动力竭现象。 2.山葵树叶提取物通过混合溶剂提取，产率为(32.37±1.71)％，且山葵树叶提取物较山葵原料相比，小鼠游泳时间显著增加19.27％(p＜0.05)，而山葵树叶提取残渣对小鼠在水中持续游泳不能发挥出增加耐力的作用;通过分析山葵树叶提取物与残渣中的相关有效成分，显示残渣中有效成分含量极低，总抗氧化力测定结果显示山葵树叶提取物中的比残渣中的高出137倍，山葵树叶提取物中黄酮含量高出1211倍，而总多酚含量是残渣中的129倍。急性毒性试验显示山葵树叶提取物实际无毒效应。 3.山葵树叶提取物在能量调节及抗氧化系统中均产生显著影响。山葵树叶提取物对小鼠器官重量没有明显影响，血浆指标中，山葵树叶提取物组中测定的Glu、BUN、Lac、GSH及NEFA含量与游泳对照组相比都存在统计学差异(P＜0.05)，其中提取物组中测定的BUN含量显著降低，而NEFA含量显著升高(P＜0.01)。小鼠体内贮存的肌、肝糖原在运动过程中均被大量消耗，补充提取物后，糖原水平有所升高(P＜0.05)，但未能达到运动前的水平。Na+K+-ATP酶在小鼠肝脏中活性高，补充后，酶活性较游泳对照组相比具有统计学差异(P＜0.05)，而肌组织中ATPase活性变化不显著。补充山葵树叶提取物后，血浆及组织中测定的SOD、CAT、GSH-Px活性呈现升高趋势，其中肝组织中GSH-Px测定活性出现极显著性升高(P＜0.01);而LDH具有分布特异性，血浆含有大量LDH，提取物组中LDH含量较游泳空白组相比明显减少(P＜0.05);提取物组的MDA含量在血浆及肝组织中的均明显低于游泳对照组的。随着运动的发生，肝组织中ORM1基因表达及蛋白含量显著增加，且转导受体CCR5的表达也具有同样的升高趋势。原因可能是运动促使脂肪分解，提取物参与了脂肪代谢，同样对糖代谢有调节作用，增加糖原合成、能量供应，对氧化应激损伤具有一定保护作用。 结论: 本研究发现山葵树叶具有良好的抗疲劳效果，其粗提物中富含相关抗氧化成分，其抗疲劳作用机制与能量代谢调节及抗氧化功能改善有关，本研究结果为抗疲劳功能性食品的开发提供新的思路与途径。
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