摘要
本文为了从家蚕蚕丝的丝胶蛋白酶解液中筛选ACE抑制多肽，具体研究内容主要包括三部分:(1)通过对蚕丝的脱胶工艺的优化获得丝胶蛋白;(2)运用理论分析与体外实验相结合的方式从丝胶蛋白酶解液中筛选ACE抑制多肽;(3)通过亲疏水性不同的高交联聚合物对丝胶蛋白酶解液中的ACE抑制多肽的初步筛选。主要研究成果如下: (1)研究结果得出在温度121℃，0.2Mpa的压力下，料液比为1∶30的高温高压下对蚕丝脱胶2h，脱胶率高达29.5％左右，其中丝胶蛋白的蛋白质含量高达96.8％。 (2)运用理论酶切点分析与实验验证相结合筛选出高活性的ACE抑制的丝胶蛋白酶解液，再基于C端氨基酸对ACE抑制活性起重要作用的策略，构建QSAR模型并预测得出丝胶蛋白酶解液中ACE抑制多肽的活性并通过合成多肽实验验证发现其预测准确性大于75％以上(log IC50＜0.7)，该方法实现了对ACE抑制多肽的快速、高通量的筛选。同时对合成多肽中活性差异最大的两个多肽(SSR和SSK)进行抑制机理分析，通过实验分析Lineweaver-Burk曲线显示两个多肽与ACE的抑制都为竞争性抑制，再通过分子对接分析发现多肽的C端含有更多的H键受体更容易与ACE活性口袋中的关键氨基酸形成氢键，因此会具有更高ACE抑制活性，从而解释了SSR(IC50=42.6μM)比SSK(IC50=239.9μM)具有更高的ACE抑制活性的原因。 (3)通过亲疏水性不同的高交联聚合物(HCP-Ben、HCP-Th和HCP-Py)对丝胶蛋白酶解液的选择性吸附来进行ACE抑制多肽的初步筛选。吸附后通过体外活性实验证实，通过HCP-Ben吸附48h后的酶解液的ACE抑制活性增加，IC50值从49.98mg/L降为37.04mg/L;通过HCP-Th和HCP-Py吸附后平衡后的酶解清液的ACE抑制活性降低，分别为80.40mg/L和60.64mg/L。达到了初步筛选的目的，为进一步纯化分离奠定良好的理论基础。
NETL