YFZ-22A诱导A549细胞凋亡机制的研究

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中文摘要：研究背景：作为患病率、死亡率最高的“癌中之王”，肺癌一直被看作一个主要的全球性健康问题。就目前来看，在肺癌的治疗方法中，仍以化疗为主。然而，伴随着化疗药物的临床使用，随之出现了毒副作用、耐药性等问题。大量研究发现，噻唑烷类化合物是一类新型、低毒的抗癌化合物，对人肺癌细胞具有较强的抑制作用。我们的研究发现，YFZ-22A作为一种新型的噻唑烷化合物具有较强的抗肿瘤作用。本研究主要针对其抗肿瘤机制进行研究。研究方法：建立裸鼠皮下移植肿瘤模型检测YFZ-22A的体内抑瘤作用；通过SRB法、CCK-8法、RTCA法检测YFZ-22A对体外培养的A549细胞的毒性；用流式细胞术检测YFZ-22A对细胞周期的影响；扫描电镜观察YFZ-22A对A549细胞表面结构的影响；Nucleosome ELISA检测A549细胞的凋亡率；通过转录组测序以及Western blot分析细胞周期、ERS相关基因及蛋白的表达变化。研究结果：体内抑瘤实验结果显示：YFZ-22A可以显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长；SRB、CCK-8和RTCA的实验结果均显示：YFZ-22A能够在体外显著抑制A549细胞的增殖，并呈剂量依赖性；流式结果显示：YFZ-22A能够将A549细胞阻滞于G2/M期；扫描电镜观察发现：随着YFZ-22A浓度增加，A549细胞由贴壁的多角形变为球形，并有凋亡小体出现；Nucleosome ELISA检测结果显示：YFZ-22A处理A549细胞后，随着药物浓度的增大和时间的延长，细胞凋亡率逐渐升高；引入多种Caspase酶抑制剂处理A549细胞后，检测细胞凋亡率的变化，结果显示：除Caspase-6酶抑制剂外，其他Caspase酶抑制剂都能逆转YFZ-22A引起的A549细胞凋亡，可以推测Caspase-3/9/4/8参与了YFZ-22A诱导的A549细胞凋亡；据转录组测序结果：筛选到细胞周期相关的差异表达基因49个，其中上调基因10个，下调基因39个；筛选到内质网应激及其介导的凋亡相关差异表达的基因48个，其中上调基因44个，下调基因4个；Western blot结果显示：随着YFZ-22A浓度的增加和处理时间的延长，细胞周期相关蛋白p53、CDK1、CDK2、Cdc25c、Cyclin A2、Cyclin B1的表达水平均逐渐降低；ERS凋亡途径相关蛋白GRP78、PERK、IRE1α、ATF4、CHOP、ASK1、p-JNK、Calpain2和Caspase-4的表达水平均逐渐升高，ATF6的表达量无明显变化。结论： 1.YFZ-22A能够体内外抑制A549细胞的生长，且具有高效性、剂量依赖性； 2.YFZ-22A可以将A549细胞阻滞于G2/M期； 3.YFZ-22A能够诱导A549细胞凋亡； 4.YFZ-22A通过内质网途径诱导A549细胞的凋亡，此凋亡作用也可能与线粒体有关。

作者：

张晶晶

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关键词：

肺癌噻唑烷化合物 A549细胞凋亡机制动物实验

授予学位：

硕士

学科专业：

生物学

导师：

赵云峰

学位年度：

2017

学位授予单位：

曲阜师范大学

语种：

中文

中图分类号：

R73