摘要
土木香（Inula helenium L.）是用于治疗胸胁脘腹胀痛、岔气作痛、胎动不安等症状的药用植物，其根含有土木香内酯（alantolactone）、异土木香内酯（isoalantolactone）等多种次生代谢产物，它们具有较好的抗肿瘤、抑菌、免疫和驱虫等作用。据“共生理论”，内生菌可以产生与宿主植物次生代谢产物相同或相似的活性物质。因此，药用植物土木香内生真菌可以作为寻找新型抗菌、抗癌活性物质的新资源。 本文采用组织分离法从土木香的根、茎、叶组织中共分离出32株菌落形态特征有差异的内生真菌。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄葡萄球菌和白色念球菌为指示菌，用纸片扩散法从32株内生真菌中筛选出11株具有抑菌活性的菌株，其中2株内生真菌对4种指示菌有较强抑菌活性，2株内生真菌对3种指示菌具有抑菌活性，5株内生真菌对2种指示菌具有抑菌活性，而2株内生真菌只能抑制1种指示菌的生长。还发现与内生真菌PDB发酵液相比查氏发酵液具有较广泛的抑菌谱。 通过显微镜观察真菌的菌落、菌丝体和分生孢子的形态特征，以及真菌ITS序列的PCR扩增、DNA测序和系统发育分析确定了10株抗菌活性菌株的分类学地位。结果表明，菌株YIGZ-1和YIGZ-3属于塔宾曲霉（Aspergillus tubingensis），菌株YIGZ-2属于Cadophora luteo-olivacea，菌株YIJZ-3、YIJZ-5和YIJZ-7属于青霉菌属（Penicillium sp.），菌株YIJZ-2和YIJZ-6属于Thanatephorus cucumeris，而将菌株YIYZ-1和YIYZ-2分别鉴定为 Bjerkandera adusta和Alternaria infectoria。 用薄层层析法（TLC）和高效液相色谱（HPLC）探讨10株抗菌活性真菌和土木香根、茎和叶次生代谢产物中的土木香内脂和异土木香内酯。TLC结果显示，菌株YIGZ-3发酵液和菌丝体提取液均出现与土木香内酯标准品颜色和Rf值相同的蓝色斑点，而土木香根提取液出现与土木香内酯和异土木香内酯标准品颜色和Rf值相同的蓝色斑点，但土木香茎和叶提取液中未检测到与土木香内酯和异土木香内酯相似的斑点。HPLC结果显示，土木香内脂标准品检出的保留时间在11.6 min，在该时间菌株YIGZ-3发酵液和菌丝体提取液以及土木香根提取液也有明显的色谱峰。本研究结果表明，菌株YIGZ-3次生代谢产物中含有土木香内脂，为发酵生产土木香内酯及土木香的综合开发奠定基础。
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