摘要
金钗石斛茎腐病是一种对金钗石斛生长最为严重的病害，造成金钗石斛产量严重下降及经济损失；其病原菌是半知菌类一个无性型内生真菌属拟盘多毛孢菌属（Pestalotiopsis）。为了避免在防治该病害时使用过多化学农药，寻找天然微生物源农药进行防治是较好方法。 为了找到一种绿色的生物防控方法防控金钗石斛茎腐病，本研究从金钗石斛的不同组织（根、茎和叶）中进行内生菌的分离鉴定，筛选具有较好抑菌效果的内生菌。通过形态学观察和16S rDAN分子生物学鉴定得到了具有抑制金钗石斛茎腐病病原真菌生长的四株内生细菌，其中三株为芽孢杆菌，一株为多粘类芽孢杆菌。 本文进一步研究了其中抑菌效果较为显著的多粘类芽孢杆菌的活性代谢产物，以抑菌活性为导向，筛选了多粘类芽孢杆菌的较好培养基为PDB培养基，最佳发酵时间为7天。通过优化发酵液的提取方法，结果表明，甲醇超声萃取发酵液的浓缩物，能够较高效率地萃取出活性物质。对代谢产物进行分离、纯化及鉴定后，确定了起抑菌作用的物质为fusaricidin家族类化合物，通过高分辨质谱进行了结构确定。在体外采用抑制菌丝生长速率法测试了fusaricidin类活性物质对拟盘多毛孢菌的EC50值在3-10μg/mL之间。病原真菌培养24小时后加入fusaricidin A/B物质（终浓度3.29μg/mL），然后在加药后3和12小时提取真菌总蛋白。采用非标记定量蛋白质组学方法分析差异表达的蛋白质，对差异蛋白进行生物信息学分析，结果表明该类活性物质抑制病原真菌生长的作用机制主要影响氧化磷酸化代谢和氨基酸生物合成，为进一步研究该类活性物质防治真菌病害的确切作用机制奠定了基础。
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