摘要
日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)，简称乙脑，是由属于黄病毒科,黄病毒属的日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的，能感染人和多种动物的人兽共患中枢神经系统传染病，具有重大的公共卫生威胁。猪是乙脑病毒重要的中间宿主和最主要的扩散宿主，猪感染乙脑后会对猪的生产性能造成巨大的影响。乙脑现在主要流行区域是亚洲的大部分地区，三带喙库蚊是主要传播媒介，在自然界中主要保持着蚊子-鸟-蚊子的自然循环。 在病毒的生命周期中，病毒与宿主蛋白存在着广泛的相互作用，解析被感染宿主的蛋白与病毒之间的关系对探索病毒生命周期至关重要。乙脑病毒的NS1蛋白是一种与膜功能相关的糖蛋白,以不同形式存在于胞内外，是乙脑病毒唯一一种可以分泌到胞外的蛋白。NS1蛋白具有补体结合活性，能够在宿主中引发机体产生保护性抗体反应。许多研究人员猜测NS1蛋白在免疫侵袭和逃避，病毒复制和翻译等生命进程中具有重要作用，但是其具体功能仍不清楚。本研究以乙脑病毒BJB毒株的NS1蛋白和前期筛选出的宿主HAX1蛋白为研究对象。构建两个分别表达Flag-BJB-NS1融合蛋白和HAX1-Strep融合蛋白的真核表达载体，共转染293T细胞，分别用标签抗体Flag和Strep进行免疫共沉淀实验，结果表明BJB NS1蛋白与宿主HAX1蛋白存在相互作用。对 HAX1蛋白分成不同截断后的免疫共沉淀实验结果表明，与 NS1蛋白互作的HAX1蛋白关键区域是203-279氨基酸。转染 NS1和 HAX1的真核表达质粒进行confocal实验，结果表明NS1蛋白和HAX1蛋白在细胞质中存在共定位，且在细胞质中互作的蛋白有积聚。进一步进行RNAi实验，发现干扰HAX1的表达后JEV的增殖情况并未发生明显变化。与此同时，我们也在实验中运用新一代的基因编辑技术CRISPR/Cas9筛选了敲除HAX1的Huh7细胞系，并对该细胞系进行病毒感染。结果表明，在病毒感染后60h敲除HAX1细胞系组与对照组的病毒滴度有明显差异，说明HAX1可能参与JEV的生命进程。但是对于HAX1蛋白参与JEV的生命进程的具体机制有待进一步的研究发现。
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