摘要
土槿皮乙酸(Pseudolaric acid B，PAB)是一个结构独特的二萜酸类天然产物，是项目组前期采用生物活性追踪法从我国特有植物金钱松中分离获得。目前国内外对该化合物的研究主要集中在抗肿瘤和医用抗真菌方面，尚未见PAB及其类似物对植物病原真菌的抑菌活性报道。鉴于此，本研究以芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)为研究对象，室内测定了PAB等8个单体化合物对芒果炭疽病菌的离体、活体抑制活性，以及对孢子萌发、和菌丝体干重的影响；并通过菌丝形态显微观察及对菌丝体细胞膜、细胞壁相关生理生化指标的测定，对PAB的抑菌作用机理进行了研究。 本研究主要内容包括：⑴采用菌丝生长速率法测试了从土槿皮乙醇提取物中分离获得的8个单体化合物对芒果炭疽病菌的抑菌作用，结果表明，化合物PAB及其类似物PAA、EPAB和PABG对芒果炭疽病菌均表现出较强的抑制作用，其EC50分别为1.07、1.62、3.7和11.30μg/mL。PAB、PAA、EPAB对芒果炭疽病菌孢子萌发的EC50值分别为3.80、5.69、11.42μg/mL，低于对照药剂多菌灵21.34μg/mL；PAB和PAA对芽管伸长的EC50值分别为0.75、1.14μg/mL，低于对照药剂多菌灵2.04μg/mL。PAB对菌丝体干重抑制率随浓度升高而升高，呈剂量依赖性，当PAB浓度为5μg/mL时，菌丝体干重抑制率达85.42%(P<0.05)。⑵采用浸果法测试了PAB、PAA、EPAB和PABG对芒果炭疽病菌的活体效果，结果显示在50和100μg/mL的处理浓度下，各处理均能显著降低芒果上的病斑大小，随剂量增大，对芒果炭疽病菌的防治效果也逐渐升高。其中PAB对芒果炭疽病的控制效果最好，50μg/mL的处理浓度下，PAB比多菌灵的防治效果高46.67%。⑶经过PAB处理的芒果炭疽病菌在光学显微镜下可见菌丝畸形分叉，弯曲或膨大，内含物聚集，出现空泡，菌丝顶端形状多样。扫描电镜观察发现，PAB处理24 h后，菌落生长速度缓慢，边缘菌丝生长杂乱，菌丝不再成线状扩展，菌丝错乱交叉成蓬松团状。菌丝及生长点畸形，出现不规则的缢缩和膨大，呈念珠状，表面大量附着外渗物，分枝增多，分枝间距变短。48 h后，生长点畸形加剧，大量分枝，内含物外渗严重，菌丝干瘪塌陷。72 h后，大多数菌丝扭曲、干瘪塌陷。⑷PAB处理后，测得溶液中电导率逐渐增大，可溶性蛋白、可溶性糖的渗漏量增加，OD260值升高，说明PAB一定程度上改变了菌体细胞膜的通透性，导致内含物的渗漏。⑸对菌丝体几丁质和葡聚糖含量测定发现，PAB处理后葡聚糖含量和对照相比差异不显著；PAB处理组(48h)几丁质含量和对照组相比降低了37.72%(P<0.05)。6.β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶活性测定结果表明，PAB作用后9 h-24h，几丁质酶活呈下降趋势，显著低于对照组酶活(P<0.05)；PAB处理0-24 h内葡聚糖酶活和对照组相比无显著性差异(P>0.05)，48h处理组葡聚糖酶活显著低于对照组(P<0.05)。
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