摘要
目的：建立丙肝合并脂肪肝患者血清感染的HepG2细胞模型，观察健脾清化方对造模成功后的HepG2细胞上清ApoB、VLDL、TG、LEP含量及HCV-RNA载量的影响，阐明健脾清化方对干扰素抗丙肝病毒作用的影响及机制。 方法：⑴将40只雄性SPF级SD大鼠分为四组，每组10只。对照组：予生理盐水灌胃10天；西药组：聚乙二醇干扰素α-2a注射液皮下注射联合利巴韦林灌胃；中药组：健脾清化方灌胃；联合组：聚乙二醇干扰素α-2a注射液皮下注射、利巴韦林及健脾清化方颗粒灌胃。10天后大鼠腹主动脉取血制备含药血清。⑵建立丙肝合并脂肪肝患者血清感染的HepG2细胞模型，此组为模型组，另设空白组作为对照，分别收集空白组及模型组48h、96h、144h、192h的细胞及上清。⑶各组含药血清分别干预对应组别HCV感染的HepG2细胞，分别在第48h、96h、144h、192h收集细胞及上清。⑷ELISA法检测细胞上清中ApoB、VLDL、TG、LEP含量，RT-PCR法检测各组细胞中HCV-RNA载量。 结果：①ApoB含量：在96h，与对照组、西药组相比，联合组ApoB含量明显升高（P<0.05）。在144h，与对照组相比，联合组ApoB含量明显升高（P<0.05）；与西药组相比，中药组、联合组ApoB含量均升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。在192h，与对照组、西药组相比，中药组、联合组ApoB含量皆升高（P<0.05）；与中药组相比，联合组ApoB含量升高（P<0.05）。西药组、中药组、联合组ApoB含量随时间变化下降趋势变缓（P<0.05）；不同组别与时间存在交互作用（P<0.05）；各组间ApoB含量因处理因素不同存在明显差异（P<0.05）。②VLDL含量：在144h，联合组VLDL含量明显高于对照组、西药组，差异具有统计学意义（P<0.05）。在192h，与对照组、西药组相比，中药组、联合组VLDL含量均明显升高（P<0.05）；联合组VLDL含量明显高于中药组（P<0.05）。西药组、中药组、联合组VLDL含量随时间变化下降趋势变缓（P<0.05）；不同组别与时间存在交互作用（P<0.05）；各组间VLDL含量因处理因素不同存在明显差异（P<0.05）。③TG含量：在48h，与对照组相比，联合组TG含量明显下降（P<0.05）；与西药组相比，中药组、联合组TG含量均降低（P<0.05）；与中药组相比，联合组TG含量降低（P<0.05）。在96h，与对照组相比，西药组、中药组、联合组TG含量下降明显（P<0.05）；与西药组、中药组相比，联合组TG含量下降显著（P<0.05）。在144h、192h，与对照组相比，西药组、中药组、联合组TG含量均明显下降（P<0.05）；与西药组相比，中药组、联合组TG含量均下降较为明显（P<0.05）；与中药组相比，联合组TG含量下降明显（P<0.05）。西药组、中药组、联合组ApoB含量随时间变化上升趋势变缓（P<0.05）；不同组别与时间存在交互作用（P<0.05）；各组间TG含量因处理因素不同存在明显差异（P<0.05）。④LEP含量：在96h，与对照组相比，联合组LEP含量明显降低（P<0.05）。在144h，与对照组相比，中药组、联合组LEP含量均降低（P<0.05）；与西药组相比，联合组明显降低。在192h，与对照组相比，中药组、联合组LEP含量均明显降低（P<0.05）；与西药组相比，中药组、联合组LEP含量均明显降低（P<0.05）；与中药组相比，联合组LEP含量明显降低（P<0.05）。中药组、联合组LEP含量随时间变化升高趋势变缓（P<0.05）；不同组别与时间存在交互作用（P<0.05）；各组间LEP含量因处理因素不同存在明显差异（P<0.05）。⑤HCV-RNA载量：在96h，与对照组相比，西药组、联合组HCV-RNA载量均下降（P<0.05）；与中药组相比，联合组HCV-RNA载量明显下降（P<0.05）。在144h、192h，与对照组相比，西药组、联合组HCV-RNA载量下降显著（P<0.05）；与西药组相比，联合组HCV-RNA载量下降明显（P<0.05）；与中药组相比，联合组HCV-RNA载量明显降低（P<0.05）。西药组、联合组HCV-RNA载量随时间变化上升趋势变缓（P<0.05）；不同组别与时间存在交互作用（P<0.05）；各组间HCV-RNA载量因处理因素不同存在差异（P<0.05）。 结论：⑴HCV感染使HepG2细胞上清中ApoB、VLDL含量降低，使TG、LEP含量升高，提示HCV感染可能干扰了HepG2细胞的脂质代谢。⑵健脾清化方抑制了HepG2细胞上清中ApoB、VLDL含量的持续降低，抑制了HepG2细胞上清中TG、LEP含量的持续升高，提示健脾清化方对HCV感染的HepG2细胞上清脂质有调节作用，对ApoB、VLDL含量具有上调作用，对TG、LEP含量有下调作用。⑶健脾清化方联合干扰素、利巴韦林不仅能够影响HCV感染的HepG2细胞上清ApoB、VLDL、TG、LEP含量，而且对HCV的抑制作用明显增强，提示健脾清化方能够增强干扰素抗病毒疗效，其机制可能与改善脂质代谢有关。
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