摘要
目的：便秘是临床常见的多种病因导致的复杂症状，缠绵难愈。长期便秘不仅影响患者的消化与吸收，也常致肠道菌群结构紊乱、诱发或加重肠炎、心脑血管疾病等，甚至与癌症的发生有关。中医在辨证论治等理论指导下，针对便秘发生的原因对症用药，如对于体虚便秘，常施以火麻仁等“润肠通便”药（或复方），往往疗效满意。笔者所在课题组认为“润肠通便”可解释为火麻仁有“滋养”与“泻下”双重功效。前期研究表明，火麻仁对便秘或衰老模型动物能够缓解便秘、改善血液循环、调节免疫、减轻自由基损伤等；能延长家蚕生存期，有一定抗衰老作用；对多种肠道菌的体外生长或体内定植有调整作用。然而，对于火麻仁“润肠通便”的确切机制有待进一步阐明。近年来研究表明肠道菌群对健康至关重要，并将调整菌群作为防治疾病与衰老的重要途径，进一步研究表明肠道菌群可通过干预TLRs通路的表达而影响健康。因此，本实验从肠道菌群调节及对TLRs信号通路影响的角度，探讨火麻仁润肠通便的作用机制，为火麻仁合理应用及开发提供基础资料，为中药基础研究提供新的思路与借鉴。 方法：⑴建立复方地芬诺酯致肠道菌群紊乱的便秘模型大鼠。 SPF级Wistar大鼠20只，使用复方地芬诺酯（0.01g/kg）进行灌胃，连续给药20d。实验结束后，检测大鼠整体指标（体重变化、肠道内容物、肠道张力变化）；肠道菌群指标（革兰氏染色检测盲肠中革兰氏阳性菌/革兰氏阴性菌（G+/G-）、杆菌/球菌比值；PCR-DGGE检测盲肠中菌群结构变化；24h粪便量、传统细菌培养计数检测粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌变化）；采用苏木精-伊红染色(HE染色)检测结肠病理变化。⑵火麻仁油对模型大鼠肠道菌群与TLRs信号通路的影响。 SPF级Wistar大鼠48只，雌雄各半，随机分为空白组、模型组（0.01g/kg）、火麻仁油组（21.6g/kg）、阳性对照组（2.7g/kg），除空白组给予蒸馏水外，其他各组分别采用复方地芬诺酯进行灌胃，造便秘模型；2h后，给予药物治疗。检测大鼠整体指标（体重、肠道内容物、24h排便）；采用ELISA法测定血清中TLRs信号通路相关因子TLR4、MyD88、NF-kB、Klotho蛋白、IL-6、IFN-a、TNF-a变化；检测肠道菌群指标（粪便中细菌变化；盲肠中G+/G-、杆菌/球菌比值，采用PCR-DGGE检测菌群结构的变化；采用气相色谱法测定盲肠中SCFAs的变化）；对结肠进行HE染色。⑶火麻仁水提液对模型大鼠肠道菌群与TLRs信号通路的影响。 SPF级Wistar大鼠48只，雌雄各半，随机分为空白组、模型组（0.01g/kg）、火麻仁水提液（21.6g/kg）、阳性对照组（2.7g/kg），除空白组给予蒸馏水外，其他各组分别采用复方地芬诺酯进行灌胃，造便秘模型；2h后，给予药物治疗。检测指标同方法2。 结果：①成功建立复方地芬诺酯致肠道菌群紊乱的模型大鼠模型。与空白组相比，模型组回肠收缩频率降低（P<0.05）；肠道内容物堆积（P>0.05）；24h排便量减少（P<0.01）；新鲜粪便中大肠杆菌及双歧杆菌增多（P>0.05，P<0.05），乳酸杆菌减少（P<0.01）；盲肠内细菌总数无显著变化、G+/G-比值、杆菌/球菌比值降低（P>0.05，P<0.05，P<0.05）；PCR-DGGE结果显示，盲肠内某些菌属增多，部分细菌种属丢失；病理结果显示结肠结构严重损坏（P<0.01）。②火麻仁油能够促进模型大鼠排便，降低粪便粒重，增加粪便含水量（P＞0.05， P>0.05，P<0.05），降低TLR4、MyD88、IL-6、TNF-a水平（P>0.05，P>0.05， P>0.05，P>0.05），升高NF-kB、Klotho蛋白、IFN-a（P>0.05，P>0.05，P>0.05）；促进排便，增加粪便含水量（P>0.05，P>0.05）；调整盲肠中G+/G-、杆菌/球菌的比值（P<0.01，P<0.05）；降低厚壁菌门/拟杆菌门比值；升高盲肠内乙酸、丙酸、丁酸水平（P<0.01，P>0.05，P<0.01）；改善肠道病理损伤（P>0.05）。③火麻仁水提液能够促进模型大鼠肠道内容物排出（P>0.05）；降低粪便粒重，促进排便，增加粪便含水量（P<0.05，P>0.05，P<0.05）；降低TLR4、MyD88、TNF-a含量（P>0.05，P>0.05，P>0.05），升高NF-kB、Klotho蛋白、IL-6、IFN-a（P>0.05， P>0.05，P>0.05，P>0.05）；降低粪便中大肠杆菌、双歧杆菌水平，增加乳酸杆菌水平（P>0.05，P＜0.05，P＜0.05）；升高模型大鼠细菌总数（P<0.01）；降低其盲肠内乙酸、丙酸、丁酸水平（P<0.01，P>0.05，P>0.05）；改善结肠病理损伤（P<0.01）。 结论：⑴便秘模型大鼠出现肠道菌群紊乱，而肠道菌群紊加重、促进模型大鼠便秘的发生与发展。该造模方法可以用于肠道菌群调节相关研究。⑵火麻仁油及水提液能够缓解模型大鼠的便秘状态、促进紊乱的肠道菌群恢复平衡、减轻结肠炎性损伤、调节TLRs信号通路的表达。⑶火麻仁油及水提液对模型大鼠的影响有一定差别，作用特点各异。4.结合前期火麻仁改善衰老及便秘模型动物血脂水平、提高免疫、减轻氧化损伤等研究结果，推测火麻仁润下通便、补中益气作用的发挥是通过改善肠道菌群结构及调节TLRs通路实现的。
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