摘要
第一部分:人参皂甙Rg1对AS迁移及相关细胞因子分泌的的影响 目的:探讨人参皂甙Rg1对星形胶质细胞(AS)迁移能力及神经修复相关细胞因子包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)以及层粘连蛋白(LN)和纤粘连蛋白(FN)表达的影响。 方法:从新生24h的SD大鼠脑部取材获得AS体外培养、纯化后,进行人参皂甙Rg1干预(40μg/ml浓度下干预)并设置对照,通过划痕实验检测人参皂甙 Rg1对AS迁移能力的影响。通过Western-blot研究Rg1对神经营养因子bFGF、GDNF、NGF的表达的影响。荧光定量 PCR分别测定两组细胞黏附分子 LN、FN的 mRNA表达。 结果:人参皂甙Rg1促进星形胶质细胞迁移,定量统计分析显示,Rg1组划痕愈合速度比对照组快(p<0.05),Rg1显著上调了星形胶质细胞神经营养因子 bFGF、GDNF、NGF的表达(p<0.05),Rg1能够显著上调星形胶质细胞 LN、FN的mRNA表达(p<0.05)。 结论:在损伤早期,人参皂甙Rg1可以提高AS的迁移能力,促进AS向损伤区域迁移的能力,上调AS神经营养因子bFGF、GDNF、NGF的表达,上调AS黏附因子LN、FN的mRNA表达,从而保护神经元,促进和引导轴突再生,促进脊髓损伤修复。 第二部分:人参皂甙Rg1调控AS促进大鼠脊髓损伤修复的实验研究 目的:研究人参皂甙Rg1对AS调控作用后修复脊髓损伤能力的影响。 方法:钳夹法建立大鼠脊髓损伤模型,随机分成三组,假手术组(sham)、对照组(vehicle组)和Rg1干预组(Rg1组),造模后第1、3、7、14、28天分别进行后肢运动功能BBB评分,并于第28d取损伤部位脊髓组织制作冰冻切片进行组织病理学和免疫荧光染色,通过Western-blot测定各组脊髓组织损伤节段中GFAP和CSPGs表达。 结果:Rg1组后肢运动功能恢复情况明显优于对照组(p<0.05),HE染色示Rg1组脊髓组织囊性病变及空洞面积明显少于对照组(p<0.05),免疫荧光双染显示,在对照组脊髓损伤区域周围检测到强大且广泛的CSPG和GFAP信号,而Rg1组CSPG和GFAP表达相对较少。 Western Blot和蛋白相对表达定量分析也显示相似的结果(p<0.05)。 结论:在损伤后期,人参皂甙Rg1可调控过度活化的AS,减少其CSPG和GFAP的表达,减少脊髓空洞面积,促进大鼠运动功能的恢复。