摘要
类风湿性关节炎（RA）是以慢性炎症为主要表现的自身免疫性疾病。常累积对称的肢体小关节，以侵蚀性滑膜炎为主要病变，可导致软骨和骨质的破坏，使关节功能受限、最终发生关节畸形，严重影响RA患者的生活质量。在RA疾病的治疗中，抑制炎性细胞浸润滑膜组织和调节体内细胞亚群的失衡有关。 赤雹属葫芦科多年蔓生草本植物，药用部位主要为块根，为满族民间常用药材。其多用于治疗跌打损伤、腰腿痛、风湿痛等，无明显的毒副作用，治疗效果显著。本研究通过采用与RA患者病理机制相似的胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型，探讨赤雹根总皂苷（TSTR）对CIA大鼠滑膜和脾脏中IL-12、IL-21及IL-23表达的影响，以了解TSTR治疗RA的相关机理。 目的： 观察TSTR对CIA大鼠滑膜和脾脏中IL-12、IL-21与IL-23表达的影响，探讨TSTR治疗RA的作用机理，为TSTR在临床治疗RA提供治疗方向和科学依据。 方法： 1.分组、造模及给药 80只SPF级8周龄雄性Wistar大鼠，适应性饲养1周后，随机取10只作为正常对照（Normal control，NC）组，其余大鼠均腹腔注射（Intraperitoneal injection,ip）5%水合氯醛（1ml/100g）麻醉，剪去背部及尾根部的鼠毛，多点注射牛Ⅱ型胶原蛋白与FC A的混合制剂，以注射点周围显现白泡为佳，1周后再加强注射1次复制CIA模型。从初次免疫后第14天开始，计算大鼠关节炎指数（AI）值，若AI≥4则判定造模成功。将模型大鼠分层随机分为模型对照（Model control，MC）组、雷公藤多苷（Tripterygium Glycoside,TG,12mg·kg-1）组和TSTR低、中、高剂量组（20、40、80mg·kg-1），每组10只。给药组大鼠每天灌胃（ig）给药1次，NC组和MC组大鼠ig等体积蒸馏水，连续给药35d。 2.检测指标 2.1 计算AI值； 2.2 HE观察滑膜病理学变化； 2.3 免疫组化检测滑膜中IL-12、IL-21和IL-23蛋白的表达； 2.4 RT-qPCR检测滑膜中IL-12、IL-21和IL-23mRNA的表达； 2.5 免疫组化检测脾脏中IL-12、IL-21和IL-23蛋白的表达； 2.6 RT-qPCR检测脾脏中IL-12、IL-21和IL-23mRNA的表达 结果： 1.TSTR对大鼠AI值的影响 以AI值≥4判定RA大鼠建模成功。治疗前，与NC组比，所有模型大鼠AI值均显著升高（P＜0.01）；治疗后，与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠AI值均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠AI值显著降低（P＜0.01）。 2.TSTR对CIA大鼠滑膜中病理变化的影响 与NC组比较，MC组滑膜细胞布局紊乱,内部可见新生血管及大量炎症细胞浸润。经给药治疗后，与MC组比较，TSTR20mg·kg-1组和TG组未见新生血管和炎性细胞浸润，TSTR40mg?kg-1组和TSTR80mg·kg-1组可见少量新生血管和炎性细胞浸润。 3.TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-12、IL-21及IL-23蛋白表达的影响 3.1 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-12蛋白表达的影响 与NC组比，MC组大鼠滑膜中IL-12蛋白表达显著升高（P＜0.01）；与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠滑膜中IL-12蛋白表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠滑膜中IL-12蛋白表达显著降低（P＜0.01）。 3.2 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-21蛋白表达的影响 与NC组比，MC组大鼠滑膜中IL-21蛋白表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠滑膜中IL-21蛋白表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠滑膜中IL-21蛋白表达显著降低（P＜0.01）。 3.3 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-23蛋白表达的影响 与NC组比，MC组大鼠滑膜中IL-23蛋白表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠滑膜中IL-23蛋白表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠滑膜中IL-23蛋白表达显著降低（P＜0.01）。 4.TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-12、IL-21及IL-23mRNA表达的影响 4.1 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-12mRNA表达的影响 与NC组比，MC组大鼠滑膜中IL-12mRNA表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠滑膜中IL-12mRNA表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠滑膜中IL-12mRNA表达显著降低（P＜0.01）。 4.2 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-21mRNA表达的影响 与NC组比，MC组大鼠滑膜中IL-21mRNA表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠滑膜中IL-21mRNA表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠滑膜中IL-21mRNA表达显著降低（P＜0.01）。 4.3 TSTR对CIA大鼠滑膜中IL-23mRNA表达的影响 与NC组比，MC组大鼠滑膜中IL-23mRNA表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠滑膜中IL-23mRNA表达显著降低（P＜0.01），TG组大鼠滑膜中IL-23mRNA表达显著降低（P＜0.01）。 5.TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-12、IL-21及IL-23蛋白表达的影响 5.1 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-12蛋白表达的影响 与NC组比，MC组大鼠脾脏中IL-12蛋白表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠脾脏中IL-12蛋白表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠脾脏中IL-12蛋白表达显著降低（P＜0.01）。 5.2 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-21蛋白表达的影响 与NC组比，MC组大鼠脾脏中IL-21蛋白表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠脾脏中IL-21蛋白表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠脾脏中IL-21蛋白表达显著降低（P＜0.01）。 5.3 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-23蛋白表达的影响 与NC组比，MC组大鼠脾脏中IL-23蛋白表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠脾脏中IL-23蛋白表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠脾脏中IL-23蛋白表达显著降低（P＜0.01）。 6.TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-12、IL-21和IL-23mRNA表达的影响 6.1 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-12mRNA表达的影响 与NC组比，MC组大鼠脾脏中IL-12mRNA表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠脾脏中IL-12mRNA表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠脾脏中IL-12mRNA表达显著降低（P＜0.01）。 6.2 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-21mRNA表达的影响 与NC组比，MC组大鼠脾脏中IL-21mRNA表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠脾脏中IL-21mRNA表达均显著降低（P＜0.01），TG组大鼠脾脏中IL-21mRNA表达显著降低（P＜0.01）。 6.3 TSTR对CIA大鼠脾脏中IL-23mRNA表达的影响 与NC组比，MC组大鼠脾脏中IL-23mRNA表达显著升高（P＜0.01），与MC组比，TSTR20mg·kg-1组、TSTR40mg·kg-1组和TSTR80mg·kg-1组大鼠脾脏中IL-23mRNA表达均显著降低（P＜0.01或P＜0.05），TG组大鼠脾脏中IL-23mRNA表达显著降低（P＜0.01）。 结论： 1.TSTR能显著降低AI值，说明TSTR对大鼠CIA有明显的治疗作用； 2.TSTR对大鼠CIA的显著治疗作用，与下调滑膜和脾脏中IL-12、IL-21及IL-23蛋白和mRNA的表达有关。
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