摘要
小分子荧光探针因其具有灵敏度高、选择性好、高通量快速筛选等特点在诸多领域得到广泛应用，比如检测生物酶活性、重金属离子、小分子化合物等。特别是近些年来，近红外荧光探针在生物组织细胞成像中表现出荧光基质干扰小、生物毒性低、组织穿透力强等优异性能，使其受到越来越多的关注。 目前，荧光探针在农药残留检测方面的应用也受到了广泛关注。大部分有机磷和氨基甲酸酯类农药可以抑制动物体内乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性。所以，本论文从荧光探针的角度出发，基于酶抑制原理，设计合成出可以检测AChE的荧光探针，利用其定量检测农药抑制后的AChE活性，从而间接检测农药的含量。 在论文第二章中，设计合成了一个系列以罗丹荧为母体的荧光探针。该类探针在传统的罗丹荧母核的荧光素端引入萘环，来拓展探针的共轭体系，使之发射波长向近红外区移动(λem=650nm)。酯键是AChE容易水解的位点，于是在分子萘环末端引入含不同取代基的酯键。从该系列化合物中筛选出能够与鸭血浆AChE反应最灵敏的探针DOS-1。该探针属于“off-on”型荧光探针，通过酶标仪检测其与胆碱酯酶反应前后的荧光强度变化来表征胆碱酯酶的活性。 本论文第三章将鸭血浆AChE作为靶酶开展实验，探究了探针检测酶活的预孵时间、反应时间、适宜浓度等条件来优化检测条件。最终，确定反应基本条件：37℃，PBS缓冲液pH为7.4，反应时间15min；探针终浓度为10μM，酶终浓度在25μg/mL内与荧光强度呈良好的线性关系（R2=0.9911），最低检测限可达0.32μg/mL。论文中选取了两种常用的有机磷农药：甲胺磷和敌敌畏；两种常用的氨基甲酸酯类农药：灭多威和呋喃丹，建立了良好的农药浓度与抑制率的线性关系，其最低检测限分别可达30μg/L、0.2μg/L、20μg/L、50μg/L，十分灵敏。后期购买了5种常见的蔬菜。将4种农药分别喷洒在5种蔬菜上，利用该荧光方法检测，测得加标回收率基本在80%-120%范围内，符合国家标准要求。实验最终证明，利用该荧光探针和鸭血AChE可以实现常见有机磷农药和氨基甲酸酯类农药的快速、方便定量检测。
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