摘要
桔小实蝇（Bactrocera dorsalis Hendel）是一种世界危害性害虫，在中国分部广泛，在长江以南地区尤为严重，每年都为农业经济造成严重损失。目前主要采取综合防治的方法来控制桔小实蝇的数量，其中，诱剂诱杀是一种高效环保的防治措施，但对桔小实蝇雌虫的诱杀效果不尽人意。因此，本研究针对桔小实蝇气味结合蛋白BdorOBP1基因进行克隆表达，荧光竞争结合实验，以对该气味结合蛋白进行功能分析，为筛选桔小实蝇雌虫诱剂提供实验依据。主要研究内容和结果如下： （1）用PCR技术克隆得到BdorOBP1a基因全长，其开放阅读框含480bp，编码159个氨基酸，通过序列对比发现与GenBank上的基因序列（登录号：KC559112）相似性为98%，蛋白序列相似性为99%，有两个氨基酸的差异，分别位于N端和C端。N端含有信号肽，由26个氨基酸组成，成熟肽的分子量为15.89KDa，等电点为5.68，有4个明显的疏水区域和1个跨膜区。与其他昆虫的序列进行对比分析表明，BdorOBP1a具有4个保守的半胱氨酸，属于“Minus-C”OBP。采用MEGA5.1最小进化法构建进化树，BdorOBP1a与辣椒实蝇Bactrocera latifrons BlatOBP99a亲缘关系最近。 （2）成功构建了pET28a-BdorOBP1a重组质粒，并转入BL21（DE3）中。经过IPTG浓度，时间，温度优化，得出最佳的诱导条件为0.5mmol/L IPTG条件下，30℃诱导6h，但表达形式均为包涵体。通过包涵体变性复性，镍柱纯化后，获得大量纯化的目的蛋白。 （3）荧光竞争结合实验结果表明，21种寄主挥发物中，BdorOBP1a可以与15挥发物结合，与酯类，醛类和酮类的结合能力较强，而与醇类的结合能力较弱。其中β-紫罗兰酮和苯甲醛的结合能力最强，解离常数分别为31.1和31.8μmol/L；其次是己酸乙酯和乙酸异戊酯，解离常数分别为45.3和47μmol/L；与其他挥发物结合的解离常数均高于50μmol/L。由此推断，BdorOBP1a具有选择性识别和结合各种配基的特性，并在桔小实蝇对寄主植物气味的定位过程中起着重要的作用。 （4）行为反应结果显示，8种低浓度（20uL/mL）单一挥发物对性不成熟的桔小实蝇雌雄成虫有一定的引诱效果（苯甲醛除外），且对雌雄虫引诱效果无明显差异，但高浓度的（100uL/mL和500uL/mL）单一挥发物对桔小实蝇的引诱效果明显下降。8种不同浓度的单一挥发物（苯甲醛除外）对性成熟的桔小实蝇雌雄成虫都具有显著的引诱作用，且对雌雄虫引诱效果无明显差异（乙酸丁酯除外）；两两单一挥发物混配中，100uL/mL乙酸异戊酯和20uL/mL乙酸叶醇酯混配对桔小实蝇雌虫的引诱作用与单一挥发物相比显著降低，100uL/mL己酸乙酯和20uL/mL乙酸叶醇酯混配与单一挥发物相比具有显著的增效效果，引诱率为62.4%；3种挥发物的混配没有明显增效效果。
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