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氧化苦参碱通过PI3K/AKT信号通路改善UC及BMSC-EVs通过H3K27me3调控UC Th17细胞分化的机制研究
陈倩云1
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摘要
本文主要从以下几方面进行论述： 第一部分 氧化苦参碱通过抑制PI3K/AKT信号通路改善UC 目的：研究苦参的主要活性成分氧化苦参碱对UC的改善作用及其作用机制。 方法：建立DSS诱导的结肠炎小鼠模型，分别用氧化苦参碱高、中、低剂量（200，100，50mg/kg）干预模型小鼠，评估小鼠疾病活动指数、结肠病理分析，观察氧化苦参碱的疗效。同时，为探讨氧化苦参碱治疗UC的机制，从PI3K/AKT通路着手，以PI3K/AKT通路经典的抑制剂LY294002为阳性对照，研究氧化苦参碱对该通路的影响及其对该通路下游凋亡蛋白、炎症介质、免疫细胞的调节作用。 结果：1、氧化苦参碱能明显改善小鼠体重和缩短的结肠长度，降低DAI评分和组织学评分，减轻结肠炎症、腺体破坏和黏膜组织损伤。2、氧化苦参碱能抑制PI3K/AKT下游抗凋亡蛋白NF-κBp65、Bcl-2的表达，同时能促进促凋亡蛋白Bad、cleaved-Caspase9、cleaved-Caspase3的促凋亡效应，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。3、氧化苦参碱能明显抑制PI3K/AKT下游炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和辅助性T细胞Th1、Th17的表达，差异具有统计学意义（P＜0.05）。4、氧化苦参碱对各组总AKT蛋白的表达影响没有统计学差异，但能明显降低磷酸化AKT蛋白的表达，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论：氧化苦参碱可通过抑制PI3K/AKT信号通路发挥抗炎、促凋亡、调节免疫的作用机制改善UC。 第二部分 BMSC-EVs通过H3K27me3调控UC Th17分化的机制研究 目的：研究BMSC-EVs对UC大鼠Th17细胞分化的影响及其表观遗传学机制探讨。 方法：建立TNBS诱导的大鼠结肠炎模型，培养大鼠BMSCs，通过梯度离心获得BMSC-EVs，用BMSC-EVs高、中、低剂量（200，100，50μg/kg）尾静脉注射干预模型大鼠，评估大鼠的炎症改善情况，检测大鼠脾脏、淋巴结Th17细胞的比例，观察BMSC-EVs对UC的疗效及对UC Th17细胞分化的影响。同时，为探讨BMSC-EVs调控UC Th17细胞分化的机制，以表观遗传学组蛋白H3K27me3为靶点，检测了结肠组织中H3K27me3和调控其表达的上游甲基转移酶（SUZ12，EZH1，EZH2，EED）和去甲基化酶（Jmjd3，UTX）等蛋白的表达水平。 结果：1、BMSC-EVs可以改善UC大鼠体重、结肠长度和重量，降低DAI评分和炎症损伤。2、BMSC-EVs能抑制UC大鼠淋巴结和脾脏中Th17细胞的比例，同时能抑制Th17细胞转录因子RORγt、STAT3和细胞因子IL-17A、IL-21、IL-22的表达，差异具有统计学意义（P＜0.05）。3、BMSC-EVs可以增加UC中H3K27me3蛋白和H3K27me3甲基转移酶SUZ12、EZH1、EZH2、EED的表达，降低去甲基化酶Jmjd3、UTX的表达，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论：BMSC-EVs可能通过调控H3K27me3抑制UC Th17细胞的分化。
关键词
溃疡性结肠炎/氧化苦参碱/骨髓间充质干细胞胞外囊泡/静脉注射/磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/辅助性T细胞17/细胞分化引用本文复制引用
授予学位
博士学科专业
中西医结合临床导师
范恒学位年度
2018学位授予单位
华中科技大学语种
中文中图分类号
R5