摘要
本文对斯氏艾美耳球虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立进行了研究。兔球虫病是由艾美耳属球虫引起的寄生性原虫病。其中斯氏艾美耳球虫致病性最强,寄生在胆管上皮细胞,能引起严重的肝球虫病。为了提高对兔斯氏艾美耳球虫感染检测的特异性和敏感性,选择虫体的COI序列,设计了斯氏艾美耳球虫的引物及TaqMan探针,并建立了斯氏艾美耳球虫实时荧光定量PCR检测方法。反应模板的浓度和CT值在107拷贝/μL到10拷贝/μL之间具有良好的线性关系,其相关系数为0.999,扩增效率为88.472%;灵敏度达10拷贝/μL;特异性强,与其他相关兔球虫没有交叉反应,且重复性良好;对接种了斯氏艾美耳球虫的家兔肝脏进行了病理学观察,可见肝肿大,表面和内部布满白色米粒大小的结节,且随着接种时间的延长,病变愈加明显,镜下可观察到球虫卵囊;同时进行实时荧光定量PCR检测,结果阳性符合率达100%。