摘要
目的:探讨天然产物大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷对皮肤黑色素瘤细胞的作用及其机制。 方法:以不同浓度的大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷分别处理A375皮肤黑色素瘤细胞，采用CCK-8法测定皮肤黑色素瘤细胞的存活率；以AnnexinV/PI双染法通过流式细胞仪检测皮肤黑色素瘤细胞的凋亡；免疫印迹法检测大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷处理过的活性caspase-3和PARP的蛋白表达；酶底物法测定caspase-8和caspase-9的活性；以JC-1为荧光探针，通过流式细胞仪测定线粒体的膜电位；免疫印迹法分别测定细胞色素C在线粒体内外的表达；免疫印迹法及realtime-PCR分别检测皮肤黑色素瘤细胞中COX-2的蛋白表达及mRNA的转录；分别以COX-2 siRNA和过表达质粒对COX-2进行沉默和过表达，以Annexin-V/PI双染法通过流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响。 结果:在CCK-8实验中，发现大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷能够有效抑制A375皮肤黑色素瘤细胞的活性，以此确定在后续实验中大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷的适用浓度；对凋亡及其通路的检测实验中，发现大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷可以有效提升皮肤黑色素瘤细胞的凋亡，增强活性caspase-3和PARP的蛋白表达，同时激活caspase-9，而对caspase-8没有显著作用，大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷能够破坏线粒体膜电位、促进细胞色素C外流，以此达到诱导黑色素瘤细胞凋亡的作用；在大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷抑制皮肤黑色素瘤细胞的过程中，COX-2的蛋白表达和mRNA转录均被显著抑制；沉默COX-2可以使皮肤黑色素瘤细胞凋亡加剧，而过表达COX-2可以明显抑制皮肤黑色素瘤细胞的凋亡，COX-2过表达与大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷对皮肤黑色素瘤细胞的作用相反。 结论:大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷能够通过抑制黑色素瘤细胞活性、促进细胞凋亡，以此实现抑制皮肤黑色素瘤细胞的作用，其促凋亡作用是通过线粒体途径而非死亡受体途径实现的，COX-2具有凋亡抑制作用，大黄素甲醚8-O-β-吡喃葡萄糖苷是通过抑制COX-2达到促凋亡作用。
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