摘要
野鸟是流感病毒的天然宿主，携带并传播流感病毒，使其在全球范围内传播，并为其创造了突变和重组的机会，流感病毒在家禽中持续感染，不断爆发疫情，给养殖业造成严重的经济损失，流感病毒还跨种传播到人，严重威胁人类的健康和生命。鉴于野鸟在传播流感病毒中的重要作用，对流感病毒的监测和防控已经成为预防流感病毒的重要手段，为什么野鸟能携带流感病毒极少表现临床症状从而在迁徙过程中传播病毒已经成为亟待解决的问题，因此本文从以下两方面内容进行了研究。 1.野鸟源高致病性H5N6亚型流感病毒的分离鉴定及其与疫情源H5N6进化分析、序列分析和生物学性状对比 在2016年11月上海九段沙保护区野生绿翅鸭的咽拭子和肛拭子样品中，用鸡胚分离法分离到高致病性H5N6亚型流感病毒，名为A/greenwing/shanghai/SH1/2016(H5N6)，构建病毒八片段质粒，获得基因全长，构建八个片段进化树，发现其与日本、韩国同期H5N6疫情中毒株同源，均来自于中国家禽市场高致病流感病毒H5N6和其他亚洲流行的病毒重组。另一株高致病性H5N6亚型流感病毒，A/Pavo Cristatus/Jiangxi/JA1/2016(H5N6)，来源于2016年2月江西吉安的H5N6疫情中死亡的养殖孔雀，将SH1和疫情源JA1 H5N6的基因序列进行对比，构建两株毒株的HA和NA片段构建进化树，发现两株病毒亲缘关系不相近。比对两株毒株的氨基酸位点发现一个在两株毒株中不同可能影响受体结合流感病毒的关键位点。比较两株毒株的受体特异性，JA1和SH1都结合α-2,3和α-2,6两种受体，更易结合α-2,3禽源受体。 2.野鸟携带并传播流感病毒原因的探索研究 将野鸟源高致病性H5N6和疫情源高致病性H5N6分别接种鸡和鸭，以鸡代表家禽，以绿头鸭代表野鸟，共四组分别为接种JA1的鸡（JC），接种SH1的鸡（SC），接种JA1的鸭（JD），接种SH1的鸭（SD），对这四组的感染率、致病率、致死率、传播率、组织噬性(感染位置)、病毒载量、炎症应答、抗体水平、排毒模式、进行了研究，探究野鸟携带并传播流感病毒原因，结果显示，感染率、致病率、致死率、传播率方面：在相同感染剂量下，JC和SC组在接种或接触1天后鸡出现严重临床症状包括昏睡、不进食、不饮水、蜷缩，两天后基本全部死亡，JD组在接种后出现严重临床症状包括失衡、转圈、眼睛变蓝并伴随体重下降，5/6鸭死亡，接触鸭存活，SD组基本无临床症状，体重下降后恢复并上升，无死亡；组织嗜性：在解剖观察、组织病理学、免疫组织化学三个层面对出现死亡的JC、SC、JD、SD三组中死亡动物的肠、胃、气管、肺进行研究，以确定病毒和宿主在呼吸道和肠道上的组织嗜性，JC、SC组在肠、胃和气管、肺之间无组织倾向性，JD和SD倾向呼吸道；病毒载量：鸭的脾、肺、脑中的病毒载量比鸡的低；IFN-γ、IL-1β应答：接种SH1的鸡2天后出现，鸭1天出现，有助于清除病毒，2天开始下降，避免炎症损伤；抗体水平：鸡不产生抗体，鸭接种后两周有抗体表达；排毒模式：JC组和SC组排毒均为咽拭子>肛拭子模式，其中有少量个体排毒肛拭子>咽拭子， JD也为咽拭子>肛拭子模式，但出现更多的个体排毒肛拭子>咽拭子，SD为肛拭子>咽拭子模式，肛拭子>咽拭子模式有助于排出病毒使动物不表现临床症状，还有助于在环境中传播病毒。 本文在对上海市进行流感病毒的监测过程中分离到一株野鸟源高致病性 H5N6 SH1，将其和疫情源高致病性H5N6进行对比包括感染率、致病率、致死率、传播率的不同，从组织嗜性、病毒载量、炎症应答、抗体水平、排毒模式五个方面解释了为什么野鸟携带并传播流感病毒，为进一步研究提供了大量科学证据，对流感病毒的防控具有重要影响深远意义。
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