摘要
目的：1）探讨核受体的表达与肾透明细胞癌预后间关系。2）探索核受体在肾癌对舒尼替尼耐药的调控作用及其相关的信号通路。 方法：1）利用TCGA数据库中肾透明细胞癌患者临床资料分析核受体的表达水平和肾透明细胞癌患者的临床特征及预后的关系。2）利用GEO数据库资料中经过舒尼替尼治疗和未经治疗的透明细胞肾癌中核受体的表达差异进行统计学分析，筛选与舒尼替尼耐药相关的核受体，并qPCR和western blot检测方法，在细胞系和动物水平上进一步筛选和验证对舒尼替尼耐药相关的核受体。3）应用以慢病毒为载体的过表达和低表达技术观察不同表达水平的候选基因PPARα调控透明细胞肾癌对舒尼替尼耐药的作用机制并进一步探索与其调控作用相关的信号通路的生物学功能。 结果：1）临床病理特征中年龄，肿瘤大小，淋巴结转移和肿瘤分期等因素以及AR，NR0B1，NR1D2，NR1I2，NR3C2，NR5A1，NR6A1，PPARα，THRB等九个核受体的不同表达水平的生存预后具有显著差异性（P＜0.05）。2）GEO（GSE65615）数据库核受体mRNA表达水平的统计学分析和RT-PCR和Western Blot检测方法和免疫组化验证结果显示PPARα与肾癌对舒尼替尼的耐药相关。CCK8检测细胞活性和半数抑制率浓度（IC50），结果显示下调PPARα的表达，抑制舒尼替尼耐药的肾癌细胞株786-0，Caki-1和A-498体外的增殖能力、半数抑制率浓度下降以及抑制在裸鼠体内的生长能力。3）RT-PCR和Western Blot结果显示，舒尼替尼耐药的肾癌细胞株786-0，Caki-1和A-498中过表达PPARα通过IKK的磷酸化激活NF-κB信号通路，组织标本中验证了PPARα的表达与NF-κBP65呈正相关。进一步的实验验证，上调PPARα的表达和抑制NF-κB信号通路，降低舒尼替尼耐药的肾癌细胞株的增殖和降低药物半抑制率浓度。提示PPARα通过NF-κB信号通路调控肾癌对舒尼替尼的耐药作用机制。 结论：本课题的研究通过分析TCGA数据库中肾癌核受体基因表达的生物学信息，筛选具有临床预后价值的核受体标记物，年龄，肿瘤大小，淋巴结转移和肿瘤分期等临床特征以及AR，NR0B1，NR1D2，NR1I2，NR3C2，NR5A1，NR6A1，PPARα，THRB等核受体是肾透明细胞癌独立的预后因素。体外实验及动物实验发现，PPARα在肾透明细胞癌对舒尼替尼的耐药中发挥着调控功能，其敲低表达可以使肾癌细胞活性下降和耐药细胞对舒尼替的药物敏感性提高。进一步的细胞实验初步阐明了PPARα可能通过NF-κB信号通路协同调控肾癌对舒尼替尼的耐药作用机制。本研究结果加深了我们对核受体在肾透明细胞癌中的生物学功能的认识，而且很可能为今后对靶向药物耐药的肾癌的治疗提供一个新的治疗靶点。
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