摘要
目的： 分析2014-2016年天津市儿童医院住院患儿手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原构成，对引起HFMD流行的肠道病毒进行分子分型，并进行MDA5及CTLA4基因多态性与肠道病毒感染手足口病易感性的相关研究，同时分析感染各型病毒的临床表现，有助于本病的预防、控制以及诊断、治疗。 方法： 采集2014年7月至2016年11月在天津市儿童医院住院患儿的手足口病临床病例标本499份，采用实时荧光逆转录聚合酶链反应RT-PCR检测肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)及柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)。采用RT-PCR法对170份其他肠道病毒阳性标本进行衣壳蛋白VP1(VP1)区全长基因扩增和序列检测，运用生物软件Chromas1.62及MEGA6.06进行测序结果分析并构建系统进化树。用SPSS20.0软件进行统计学分析。对389例通过RT-PCR成功进行VP1区基因分型的患儿血清标本，采用酶联免疫吸附法(Enzymelinkedimmunosorbant assay,ELISA)检测EV71IgM抗体，CV-B组的IgM和IgG抗体。用PCR直接测序法法对151例感染肠道病毒的HFMD患者与正常对照组的黑色素瘤分化相关基因5(Melanoma differentiation-associatedgene5,MDA5)rs1990760和细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T-lymphocyte antigen4,CTLA4)rs231775两位点进行了基因多态性分析。 结果： 499份标本中检出EV阳性429份，EV71、CVA16及非EV71非CVA16其他肠道病毒(其他EV)分别占54.1%(232/429)，6.3%(27/429)和39.6%(170/429)；170份其他EV阳标本中检出柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CVA10)阳性47份(11.0%,47/429)，柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CVA6)阳性35份(8.2%,35/429)。28例EV71，22例CVA10和16CVA6VP1亲缘进化树分析分别显示，28例EV71序列均为C4基因亚型的C4a分支，22例CVA10序列均为G型，16例CVA6序列均为F型。EV71-IgM、CVB-IgM、CVB-IgG的特异性分别为93.6%、82.6%、71.5%。分别与无症状对照组相比，肠道病毒感染的手足口病的患儿MDA5基因rs1990760G/A及CTLA4基因rs231775A/G两位点的基因型和等位基因的差别没有统计学意义(P均＞0.05)。 结论： 1、本次研究共检出21种不同的肠道病毒，虽然EV71的阳性率仍为最高，但非EV71非CVA16的其他肠道病毒类型及比例也呈现增多的趋势，同时通过对进化树的构建及分析，发现本次研究中导致HFMD的EV71仍属C4a亚型，而CVA10聚集成G群，CVA6聚集成F群。 2、本次实验研究的499例患儿中，共发现普通症状30例，重症患儿402例，危重症患儿67例。患病以5岁以下儿童最常见，1岁组患儿阳性检出率最高，应警惕幼龄儿童发展为重症的可能。EV71平均住院时间最长，由EV71感染引起的HFMD发展成重症的例数最多，达总患病儿童发展为重症的49%，且EV71感染的患儿中有96.12%会出现神经系统并发症，由CVA16感染引起的HFMD患儿的平均年龄最大。 3、ELISA法检测CVB-IgM、CVB-IgG抗体阳性预测值过低，且EV71-IgM和CVB-IgM、CVB-IgG之间存在交叉反应。 4、肠道病毒感染的手足口病的患儿MDA5基因rs1990760G/A及CTLA4基因rs231775A/G两位点的基因多态性与是否患病无显著相关性，对影响HFMD易感性和严重程度的宿主免疫应答机制还需要进一步研究。
NETL