摘要
目的： 研究MCSF-1介导的肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）对子宫内膜癌孕激素抵抗的影响，以及通过阻断MCSF以抑制人子宫内膜癌KLE细胞后MCSF-1的表达情况。 方法： 1.利用Ficoll密度梯度离心法得到人外周循环血的单个核细胞，再分别进行贴壁法和免疫磁珠阴性分选法，继续纯化分离人单核细胞，作巨噬细胞原代培养模型；流式细胞术分别检测其两种方法的细胞分选纯度；通过人IL-4和IL-13刺激诱导单核细胞变成巨噬细胞，用M0代表活化后的巨噬细胞，利用流式细胞术检测单核细胞向TAMs的转化效应。 2.选取人子宫内膜癌细胞株（Ishikawa、KLE细胞），构建人EC细胞与单核巨噬细胞的Transwell共培养模型。细胞计数观察Ishikawa、KLE细胞共培养组与单独培养组的细胞生长速率；利用细胞因子蛋白抗体芯片检测四组细胞上清培养液中细胞因子的含量表达水平；Real Time PCR法检测四组细胞的MCSF-1、PRA、PRB、DNMT1、MicroRNA152的mRNA表达情况；Western Blot法分析DNMT1、MCSF-1和MAPK、AKT磷酸化的蛋白水平变化。 3.通过构建人EC Ishikawa细胞的BABL/c-nu裸鼠皮下异体移植瘤模型，评价单核巨噬细胞M0处理对移植瘤的促生长效果；Real Time PCR法检测CD163、PR、DNMT1、CCL22、Micro RNA152的mRNA表达；免疫组化法分析移植瘤中EC有关的标志物CD163、PR、DNMT1和CCL22。 4.选取低分化的人EC KLE细胞，采用siRNA干扰技术敲低MCSF因子，应用Real Time PCR法检测MCSF-1、PR、DNMT-1、Micro RNA152的mRNA表达情况；MTT法分析细胞的生长情况。 结果： 1.贴壁法和免疫磁珠标记阴性分选法分离单核细胞CD14+的阳性率纯度分别为52.9%和75.3%，免疫磁珠法分离单核细胞的阴性率3.81%，及细胞的获得率分别约为6.26%和5.93%。共培养后，M0细胞表达TAMs标记物CD163、CD206的数量，高于单独培养组（P＜0.05）。 2.两种细胞共培养组相比单独培养组，细胞生长速率升高（P＜0.05）；细胞上清液MDC（CCL22）、EGF、MCP-1细胞因子浓度显著升高（P＜0.01）；MCSF-1、DNMT1的mRNA表达量水平升高，PRA、PRB、MicroRNA152均表达量下降（P＜0.05）；KLE细胞相比Ishikawa细胞，无论是单独或共培养，PRA、PRB、MicroRNA152表达量均较低（P＜0.05）。 3.Ishikawa细胞共培养相比单独培养，MCSF-1、DNMT1的蛋白表达水平升高，MAPK、AKT蛋白的磷酸化水平下调（P＜0.05）；然而，KLE细胞共培养相比单独培养，MCSF-1、DNMT1的蛋白表达水平下降，MAPK、AKT蛋白的磷酸化水平上调，其中MAPK、AKT的蛋白磷酸化表达均明显高于Ishikawa细胞（P＜0.05）。 4.在裸鼠皮下移植瘤模型上，单核巨噬细胞M0处理组，其MCSF-1、DNMT1、CCL22的mRNA表达量升高（P＜0.05），PR和MicroRNA-152的mRNA表达量下降（P＜0.05），免疫组化分析，CD163蛋白在NS组低表达，M0组高表达；在NS组PR低表达，M0组PR高表达；DNMT1和CCL22蛋白在NS组低表达，M0组高表达。 5.敲低MCSF后的KLE细胞，MCSF-1、DNMT1的mRNA表达水平均下调，而Micro RNA152和PR升高（P＜0.05）；MTT显示其细胞生长曲线减慢（P＜0.05）。 结论： 人EC的Ishikawa和KLE细胞与人单核巨噬细胞M0共培养后，可促进肿瘤细胞生长，MCSF-1和DNMT1的基因和蛋白表达升高，而MicroRNA152表达下降；敲低MCSF后的KLE细胞，DNMT1的mRNA表达下调，PR升高，说明抑制MCSF能提高PR的表达。人单核巨噬细胞M0能促进人EC Ishikawa细胞在BABL/c-nu皮下移植瘤的生长和TAMs的浸润。 在肿瘤组织微环境中，MCSF-1可能通过招募活化TAMs来介导参与EC的发生发展，并引起孕激素受体的丢失，最终导致孕激素抵抗。
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