摘要
目的：通过体内、体外实验，探讨桂枝茯苓丸加地龙对人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制作用。 方法：本实验研究分体外和体内两部分。体外实验：培养人卵巢癌SKOV-3细胞，应用MTT方法检测肿瘤细胞增殖抑制率；应用流式细胞仪检测桂枝茯苓丸加地龙对卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响；应用RT-PCR和Western Blot法检测SKOV-3细胞中Caspase-3以及Bcl-2的表达。体内实验：将体外培养的人卵巢癌SKOV-3细胞移植入裸鼠背部，待成瘤后，给予裸鼠桂枝茯苓丸加地龙治疗，于治疗当天、第3天、7天、11天以及14天观察并测量植入肿瘤的体积，并计算桂枝茯苓丸加地龙的抑瘤率；应用PCR检测Caspase-3和Bcl-2mRNA的表达；应用ELISA法检测CA125的表达；应用免疫组化法检测SKOV-3细胞中Caspase-3和COX-2的表达水平。 结果：体外实验： （1）实验结果得出IC50=0.8mg/ml，以下体外实验中选择药物治疗浓度分别用0mg/ml，0.2mg/ml，0.4mg/ml，0.8mg/ml以及1mg/ml； （2）应用MTT法检测桂枝茯苓丸加地龙作用SKOV-3细胞后24h、48h、72h细胞增殖抑制率，结果显示：随着治疗时间的延长，药物浓度的增加，肿瘤细胞的存活率明显下降（P＜0.01）； （3）在人卵巢癌SKOV-3细胞中加入桂枝茯苓丸加地龙药液后，随着药物剂量的提高，肿瘤细胞的凋亡率明显上升（P＜0.01）； （4）随着桂枝茯苓丸加地龙药液浓度的增加，卵巢癌细胞中Caspase-3表达升高、Bcl-2的表达降低。 体内实验： （1）桂枝茯苓丸加地龙对裸鼠皮下肿瘤生长的影响：治疗前各组裸鼠肿瘤大小差异无统计学意义（P＞0.05），随着治疗天数的增加，三组裸鼠肿瘤体积产生明显差异有统计学意义（P＜0.01）； （2）在检测CA125的实验中可得出以下结果：治疗开始前，治疗组、对照肿瘤细胞中CA125的表达无明显差异（P＞0.05），随着治疗天数的增加，三组裸鼠肿瘤CA125水平产生明显差异（P＜0.01）有统计学意义； （3）通过Real-Time PCR检测Caspase-3和Bcl-2mRNA的表达发现，经桂枝茯苓丸加地龙治疗后，裸鼠肿瘤组织中Caspase-3表达明显上调，Bcl-2表达明显下调； （4）在检测Caspase-3蛋白的表达中得出的结果如下：阴性对照组（15只）：阴性表达为9只，弱阳性表达为4只，阳性表达为2只；治疗组（15只）：阴性表达为3只，弱阳性表达为3只，阳性表达为6只，强阳性表达为3只；阳性对照组（15只），阴性表达3只，弱阳性表达为1只，阳性表达为6只，强阳性表达为5只。三组相比差异显著，有统计学意义（P＜0.05）； （5）在检测COX-2的表达中得出以下结果：阴性对照组（15只）：阴性1只，弱阳性1只，阳性6只，强阳性7只；治疗组（15只）：阴性6只，弱阳性4只，阳性3只，强阳性2只；阳性对照组（15只）：阴性7只，弱阳性4只，阳性3只，强阳性1只。三组比较差异显著，有统计学意义（P＜0.05）。 结论：（1）桂枝茯苓丸加地龙可以抑制卵巢癌SKOV-3细胞的生长； （2）桂枝茯苓丸加地龙可以促进卵巢癌SKOV-3细胞的凋亡； （3）桂枝茯苓丸加地龙可以升高卵巢癌SKOV-3细胞中Caspase-3的表达； （4）桂枝茯苓丸加地龙可以降低卵巢癌SKOV-3细胞中Bcl-2的表达； （5）桂枝茯苓丸加地龙可以降低卵巢癌SKOV-3细胞中CA-125的表达； （6）桂枝茯苓丸加地龙可以降低卵巢癌SKOV-3细胞中COX-2的表达； （7）桂枝茯苓丸加地龙可能通过调节Caspase-3信号转导通路，抑制抗凋亡基因表达，促进肿瘤细胞的凋亡，以达到治疗肿瘤的目的。
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