摘要
积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)为伞形科植物积雪草的干燥全草,应用历史悠久,资源丰富.现代医学研究表明积雪草有抗抑郁、促进伤口愈合、治疗瘢痕、抗肿瘤、抗胃溃疡、抗菌、抗氧化等生理功效.积雪草中的活性成分主要是皂苷及皂苷元类,包括积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸和羟基积雪草酸等,这些天然产物活性成分的分离和纯化以及应用一直深受研究者们的关注. 本文采用超声波辅助法提取积雪草苷和羟基积雪草苷.通过单因素实验和正交优化试验优化,同时综合考虑成本等因素,确定最优提取参数:料液比1∶20,70%乙醇浓度,提取温度50℃,超声功率100%,提取时间1h.采用活性炭作为脱色剂对积雪草粗提液进行脱色除杂,最终确定在活性炭添加量为0.5%、脱色时间为15min、脱色温度为40℃的条件下对积雪草粗提液进行脱色.采用壳聚糖絮凝法对脱色后的积雪草提取液中的蛋白质和多糖进行进一步除杂,确定絮凝液的添加量为0.5%、絮凝温度为40℃、絮凝时间为3h. 采用大孔吸附树脂对积雪草提取液进行纯化.通过静态吸附和解析确定吸附树脂型号为D-4020树脂,其对总积雪草苷的吸附量达到52.93mg/g、吸附率为79.36%、吸附饱和时间为5h、解析率为97.6%;洗脱液为浓度70%的乙醇;通过动态吸附和解析,在上样浓度为0.69mg/mL、流速为5mL/min的条件下,确定上样量为400mL,并采用浓度为70%的乙醇溶液进行洗脱,最终得到洗脱曲线.对粗提液浓缩产生的沉淀进行初步研究,制备得到积雪草提取物B,通过薄层层析和高效液相色谱法分析得出其主要成分为积雪草酸和羟基积雪草酸. 对两种积雪草提取物积雪草提取物A和积雪草提取物B进行功效测定.浓度为0.1mg/mL的积雪草提取物A和积雪草提取物B对透明质酸酶的抑制率分别为96.94%和51.43%,显示出很强的抗敏作用;积雪草提取物A和积雪草提取物B对DPPH·的清除率分别为93.2%和56.69%;积雪草提取物A和积雪草提取物B的FRAP值分别为7.78mmolFe2+/g和3.67mmolFe2+/g;积雪草提取物A和积雪草提取物B对O2-·也有显著的清除作用,其中积雪草提取物A的清除作用更显著;积雪草提取物A和积雪草提取物B对酪氨酸酶的抑制率分别为19.13%和12.30%,说明两者在美白方面的功效不明显;在人体功效实验中,通过分析红区占比、皱纹占比以及脸颊和眼周图片对比,可以得知积雪草修复精华液有减轻红血色的功效. 综上所述,积雪草提取物的有效分离和纯化是可以通过超声醇提、脱色、絮凝等步骤简易实现,这为高效制备积雪草提取物提供了坚实的技术基础.同时,积雪草提取物的体外功效测定以及人体安全性功效测定结果提示,积雪草提取物可以作为潜在的功效提取物应用于化妆品市场,前景广阔.
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