摘要
目的： 姜黄素（Curcumin , CU）是从一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的多酚类物质，其具有丰富的药理作用，如：抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗纤维化、抗人类免疫缺陷病毒等。临床发现姜黄素对于各种类型肿瘤都有潜在的抑制作用，因此姜黄素的抗肿瘤作用已然成为了研究的热点。但是它的临床应用受到代谢迅速、生物利用度低等缺点的限制。因此，本文对 CU 进行结构修饰，得到了衍生物 CUD，然后通过薄膜-超声分散法研制 CUD 固体脂质纳米粒（CUD-SLN）并对其理化性质及药代动力学行为进行考察。 方法： 1、衍生物CUD的合成分离与表征：以三乙胺催化CU苯环上活泼酚羟基与RoCL进行反应制得CU衍生物CUD，然后采用紫外、核磁共振碳谱和氢谱及质谱等对其结构进行确定。 2、CUD-SLN的制备与处方优化：以氢化大豆卵磷脂（HSPC）和泊洛沙姆（F-68）为包裹材料，乙醇/三氯甲烷为混合溶媒，采用薄膜-超声分散法制备了CUD-SLN。利用单因素试验考察法，以包封率、粒径、PDI和载药量为主要指标对其处方进行优化，考察了溶剂挥发温度、HSPC:F68、CUD:（HSPC+F68）、均质循环次数、冻干保护剂对纳米粒性能的影响，获得最优处方和工艺。以最优处方工艺重复三批样品，考察处方工艺的稳定性。并对CUD-SLN的理化指标如包封率、载药量、粒径、PDI、形态及药物分布形式等进行考察。 3、大鼠血浆样品分析方法的建立：采用高效液相色谱法(HPLC)建立CU及CUD生物样品分析方法，并对其专属性、日内及日间精密度、回收率、稳定性等进行考察。 4、大鼠体内药代动力学行为评价：以尾静脉注射方式给予 SD大鼠50mg/kg剂量的CU、CUD或CUD-SLN，考察其在大鼠体内的药代动力学行为。用 DAS2.1.1 药动学软件进行拟合，得到三者的主要药动学参数如药时曲线下面积（AUC）、半衰期（t1/2）和清除率（CL）等并进行比较。 结果： 1、衍生物CUD的合成分离与表征：成功合成CU新构型衍生物CUD，其紫外最大吸收波长为409nm；高效液相色谱法测得其保留时间为21min左右，面积归一化法算得纯度＞99%；熔点为201.5℃；核磁共振和质谱结果表明合成的物质为目标化合物，结构新颖，目前无任何文献报道。 2、CUD-SLN的制备与处方优化：（1）紫外分析波长的确定：通过紫外扫描，CUD在409nm处存在最大吸收峰，且相关辅料在此处均无干扰，故本实验选择409 nm作为检测波长。（2）标准曲线的绘制：CUD在乙酸乙酯：甲醇（9:1 v/v）或溶出介质（2%吐温-80 PBS缓冲溶液:乙醇=3:2 v/v）中的标准曲线方程分别为y=0.0659x + 0.0002 （R2=0.9999）和y=0.0495x - 0.0061（R2=0.9998），线性范围分别为0.6-40.0 μg/ml和0.4-40.0μg/ml。（3）CUD-SLN的制备及其处方工艺优化：按HSPC:F68=4:7、CUD:（HSPC+F68）=1:3的配比、30℃为溶剂挥发温度、均质循环次数为 14 次、冻干保护剂为 1.25%蔗糖、包封率为96.7±0.2%、载药量为6.2±0.2%、平均粒径为112.7±2.7nm, PDI为0.169±0.011。透射电镜（TEM）结果显示CUD-SLN为球形，差示扫描量热法（DSC）和X射线衍射法（X-RD）结果表明CUD在CUD-SLN中以非晶体形式存在。 3、大鼠血浆样品分析方法的建立：（1）HPLC 色谱条件为：色谱柱：Inertsil ODS-；保护柱：m；柱温：30℃；进样量：50 μl；CUD洗脱时间：35 min，CU洗脱时间10 min，0.1%磷酸乙腈溶液为流动相，流速为1 ml/min，检测波长409 nm。（2）大鼠血浆样品分析方法的建立：取100 μl大鼠血浆，精密加入药物溶液100 μl，涡旋混匀30s，然后精密加入25 μl柠檬酸缓冲液溶液（pH=3.5）涡旋混匀1 min，再加入0.5 ml萃取剂（乙酸乙酯：甲醇，9:1，v/v），涡旋混匀3min， 8000 rpm离心3 min，吸取上清液，重复上述操作一次，合并两次所得上清液，37℃氮气吹干，向干燥残留物中加入200 μl复溶溶剂（乙腈：二氯甲烷，99:1，v/v），涡旋混匀5 min，10000 rpm离心10 min，取上清液进样分析。（3）大鼠血浆样品分析方法的验证：大鼠血浆中， CU的保留时间3min左右，CUD的保留时间为21min左右，空白血浆在CU及CUD出峰处无干扰，专属性良好。CU血浆标准曲线为：y=157.21x +0.148，R2=0.9991，线性范围：0.02-12μg/ml；CUD血浆标准曲线因为跨度太大分为了两部分，低浓度为：y=18.159x+0.4884，R2=0.9998，线性范围：0.08-5μg/ml；高浓度为 y=46.552x-179.81， R2=0.9997，线性范围：5-160μg/ml。血浆样品的相对回收率85-105%之间，绝对回收率79-100%之间，相对标准偏差（RSD）均小于5%，回收率高。日内与日间精密度实验中，血浆样品的变异系数（CV）均小于13.76%，室温24h稳定性中，血浆样品的变异系数（CV）均小于 13.20%，故该HPLC法符合实验要求，可用于CU与CUD的血药浓度测定。 4、大鼠体内药代动力学行为评价：以尾静脉注射方式给予 SD大鼠 50mg/kg 剂量的 CU、CUD 或 CUD-SLN 后，CU、CUD 及CUD-SLN的AUC(0-∞)（mg/L*h）分别为4.884、4852.555、174.245， t1/2（h）分别为5.6、38.915、14.774，CL（L/h/kg）分别为10.237、0.01、0.287。 结论： 1、衍生物CUD的合成分离与表征：以三乙胺催化CU苯环上活泼酚羟基与RoCL进行反应制得CU衍生物CUD，操作简便可行，获得的产物纯度高。结构新颖，目前无任何文献报道。 2、CUD-SLN的制备与处方优化：该制备工艺简便易于重复，制得的CUD-SLN性能优良，包封率高，粒径均匀，载药量适宜。可用于CUD的后续实验研究。 3、大鼠血浆样品分析方法的建立：成功使用HPLC建立CU及CUD 大鼠血药浓度的分析方法，该方法专属性强，线性关系良好，回收率、精密度高，在室温24h条件下稳定性好，该方法未见文献资料报道，有一定创新性。 4. 大鼠体内药动学行为评价：CUD、CUD-SLN 与 CU 相比， AUC0-t显著提高，t1/2显著延长，即 CUD 作用时间相对增加，CUD生物利用度显著提高。
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