摘要
百合是多年生鳞茎植物，属百合科 (Liliaccae) 百合属 (Lilium) 植物。种质资源保存为新品种选育和遗传改良提供了基因资源。病毒病害是制约百合生产的关键因素之一。病毒检测是病毒病防治、无毒苗生产和海关检验检疫的必备技术。本研究以百合试管苗为试材，旨在（1）创建百合茎尖超低温保存的新技术，为百合种质资源超低温基因库的建立提供了技术平台；（2）初步建立了百合茎尖超低温疗法脱毒技术；（3）建立百合病毒的 TAS-ELISA、RT-PCR、直接微样 RT-PCR (microtissue direct RT-PCR, MD RT-PCR)和免疫组织化学定位法等多种病毒检测技术。本研究主要结果如下： 1. 以‘西伯利亚’百合(Lilium Oriental hybrid‘Siberia’) 为试材，建立了带不定芽叶片小块超低温保存技术。将百合的叶片外植体培养在不定芽诱导培养基上，培养12天后，从叶片外植体上切取至少携带一个不定芽的叶方形小块 (Small leaf squares，SLS，3×4 mm)。将 SLSs 培养在含有0.5 M蔗糖的预培养基上培养1天，用有加载溶液处理20分钟，随后在0℃条件下，将加载处理过的SLSs用PVS2溶液脱水7小时。将材料置于铝箔条上，直接投入液氮保存。液氮保存1个小时后，将材料取出，立即投入含有1.2M蔗糖的卸载液之中复温及解冻20分钟。解冻后的材料培养在再生培养基上，这种方法超低温保存后的成活率为85%，再生率为72%。 2. 以感染黄瓜花叶病(Cucumber mosaic virus, CMV) 的L.Oriental hybrid‘Siberia’, L. Asiatic hybrids‘Elite’和L. longiflorum Oriental‘Triumphator’ 为试材，利用小滴玻璃化法超低温处理茎尖，三个材料的生活率分别为95%，73%和60%，再生率分别85%， 72%和43%。超低温疗法对CMV的脱毒率初步检测结果分别为85%、80%和73%，上述结果待进一步确定待测定。 3. 以带 CMV 的‘西伯利亚’百合(L.Oriental hybrid ‘Siberia’) 为试材，建立了TAS-ELISA、RT-PCR、直接微样 RT-PCR (MD RT-PCR)和免疫组织化学定位法技术。MD RT-PCR和RT-PCR的灵敏性一致。 上述研究为建立百合种质资源超低温基因库搭建了技术平台，为百合无毒苗生产开辟新途径，百合病毒病检测提供了新技术。
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