摘要
芝麻酚（Sesamol）是芝麻提取物中的一种具有天然抗氧化性的小酚类物质，也是芝麻油香气的主要成分。由于其具有较强的抗氧化性，因此可以使芝麻油长期而稳定的保存。相关研究表明，纳米级单质硒具有较高的生物利用率，诸如：提高机体免疫力、抗氧化抗炎、促进肿瘤细胞凋亡等生物功效，但其不稳定，需要对其表面进行修饰。因此，在前人的研究基础上，本研究以聚乙二醇200 （PEG-200）修饰硒纳米粒子（PEG-SeNPs）并荷载芝麻酚，通过其协同增效作用而诱导HepG2细胞凋亡并进一步对其机制进行研究。主要研究内容及结果如下： （1)制备结合芝麻酚的聚乙二醇 200 修饰的硒纳米粒子（Sesamol-PEG-SeNPs），并通过紫外可见光谱（UV-vis）分析、场发射扫描电镜（PESEM）分析、近红外图谱（FT-IR）等分析手段对其进行表征。紫外可见光谱仪图谱中显示出芝麻酚的特征峰与 PEG 硒纳米粒子的特征峰，表明二者结合；激光粒度仪测出其尺寸分布范围为 90-120nm；场发射扫描电镜观测出其形貌为球状并均匀分布；红外光谱仪对其官能团进行分析，进一步表明芝麻酚与PEG硒纳米粒子的结合。 （2）用 MTT（3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐）对不同浓度的Sesamol-PEG-SeNPs纳米粒子处理12及24小时的HepG2细胞（人肝癌细胞）与 HL7702 细胞（人正常肝细胞）进行活性测试。结果表明纳米粒子对HL7702细胞活性无明显影响，对HepG2细胞活性呈现时间和浓度依赖性抑制。用不同浓度的Sesamol-PEG-SeNPs纳米粒子处理HepG2细胞12h后进行细胞形态学观察；并用AO（吖啶橙）/EB（溴化乙锭）及DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）对细胞进行荧光染色，观察分析细胞的凋亡情况；结果发现，相对于对照组，不同浓度的处理组均使得 HepG2 细胞凋亡数目明显增多，而且呈浓度依赖的趋势。 （3）通过活性氧（ROS）、线粒体膜电位（JC-1）的改变对纳米粒子诱导HepG2 细胞凋亡进行定性及定量分析。结果表明，纳米粒子可随浓度依赖性地使得 HepG2 细胞中的活性氧水平升高，使得线粒体膜电位改变依次增加。另外在MTT试验中也表明芝麻酚和PEG-SeNPs起到了协同促进HepG2细胞凋亡的效果，并且流式细胞仪分析结果进一步验证了这一结论。 （4）对HepG2细胞凋亡的机制进行探究。结果表明，纳米粒子可呈浓度依赖性地促进 HepG2 细胞产生活性氧，并呈浓度依赖性地使线粒体膜电位发生改变。相比于同等组分下的硒纳米粒子和游离的芝麻酚，结合有芝麻酚的硒纳米粒子展现出了最好的诱导 HepG2 细胞凋亡的作用。其作用机制主要有以下几个方面：首先，纳米粒子可以通过线粒体凋亡途经促进 HepG2 细胞凋亡；其次，纳米粒子可以通过死亡受体途经促进 HepG2 细胞凋亡；另外，纳米粒子还可以通过作用于PI3K/AKT以及MAPK信号转导通路诱导HepG2细胞凋亡。
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