摘要
三阴性乳腺癌（TNBC）是一种以高侵袭性及转移性为特点的乳腺癌分子亚型，由于其ER/PR/HER-2表达均为阴性，临床上内分泌及曲妥珠单抗治疗均无效，术后辅助化疗是其主要的治疗手段，但随着化疗耐药的不断发生，更使这类患者陷入无药可用的境地，最终导致此类患者预后差、死亡率高。因此，寻找新的有效治疗药物，并明确其治疗机制是目前最为迫切任务之一。漆黄素是一种可以从多种蔬果植物中提取到的天然黄酮类化合物，虽然其已被证实在多种癌症中具有明确的抗肿瘤作用，但其在三阴性乳腺癌中的作用及机制尚不清楚。 在本项研究中，通过MTT法我们发现，相较于对照组，漆黄素可以明显抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231及BT549的增殖，通过划痕及transwell实验发现漆黄素可以抑制这两种细胞的迁移及侵袭，且均具有一定的剂量依赖性。在机制方面，我们通过细胞形态的改变，免疫荧光（IF）、免疫印迹（WB）、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）对细胞中上皮间质转化（EMT）相关标记分子、转录因子（TFs）、上游信号分子及细胞骨架丝状肌动蛋白（F-actin）表达水平的检测，发现漆黄素处理后的MDA-MB-231及BT549细胞由长梭形变为椭圆形，细胞中上皮表型分子E-cadherin、Claudin的蛋白质及mRNA表达水平上升，而间质表型分子N-cadherin、Vimentin、EMT激活相关的转录因子Snail的表达下降，F-actin发生重塑。另外，上游信号分子PTEN的蛋白及mRNA表达被上调，而p-Akt及p-GSK-3β的蛋白表达被下调。在沉默PTEN后，上述漆黄素对细胞增殖、迁移、侵袭、EMT及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的抑制作用均随之减弱。在体内实验中，通过MDA-MB-231细胞构建Balb/c裸鼠乳腺癌模型并对原位肿瘤及肺脏进行相关检测，我们发现漆黄素可以抑制肿瘤的生长及肺转移，免疫组织化学（IHC）结果显示原位肿瘤中Ki67的表达受到抑制，肺脏表面结节计数及肺组织HE染色结果显示转移结节数量明显减少，此外，IHC、IF及WB结果均显示原位肿瘤组织中EMT相关标记分子、TFs、PTEN、p-Akt及p-GSK-3β的表达变化与细胞实验结果一致。 综上所述，漆黄素可以抑制三阴性乳腺癌生长及转移，这种作用可能是通过抑制PTEN/Akt/GSK-3β信号通路的激活，进而逆转EMT过程而实现的。
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