摘要
背景： 抑郁症已成为全世界面临的公共健康问题。研究发现抑郁症存在小胶质细胞的炎性活化，且小胶质细胞的炎性活化与促丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)参与调控的丝裂原蛋白活化激酶(MAPKs)信号通路有关。本实验以SD雄性大鼠为研究对象，用CUMS造模的方法和腺相关病毒转染技术，分别构建抑郁模型大鼠和MPK-1过表达大鼠，通过检测MKP-1表达以及小胶质细胞炎性活化水平，探索调控MKP-1表达与小胶质细胞炎性活化在抑郁症中的作用机制。 目的： 探究调控大鼠海马MKP-1活性后MAPK家族蛋白水平变化与小胶质细胞炎性活化的关系，了解MKP-1及MAPK信号通路促进小胶质细胞炎性因子释放的作用机制。初步明确MKP-1通过MAPK信号通路介导小胶质细胞炎性活化从而参与抑郁症发生的分子机制，以期为抑郁症神经炎症假说提供支持性证据。 方法： 1.SD大鼠的分组 SPF级SD大鼠80只，依据首次行为学结果，随机分为正常组、CUMS组、空载体组(Control)和过表达组(MKP-1)。 2.大脑立体定位注射 空载体组和MKP-1过表达组在行为学测评后，应用脑立体定位仪进行腹侧海马微量注射。空载体组和MKP-1过表达组不给予CUMS造模。 3.CUMS大鼠模型制备 CUMS组接受为期5周的CUMS造模。每天只给予1-2种刺激，采用随机方法，每种刺激在一周内不重复出现，使大鼠不能预测到下一个刺激。 4.采用旷场试验、蔗糖偏好试验及强迫游泳分别对各组大鼠进行行为学评估。 5.应用免疫印迹法(Western blotting)检测四组大鼠海马区MKP-1、FLAG、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38及p38等蛋白表达。 6.应用免疫组织化学技术检测各组海马脑区内钙结合蛋白-1(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba-1)的表达。 7.应用荧光定量PCR(Quantitative RT-PCR)验证各组海马组织中各炎性细胞因子的表达变化。 8.统计方法 计量资料采用均数±标准差((x)±s)表示。每组大鼠组间的行为学数据、小胶质细胞的差异、细胞因子水平的变化使用单因素方差分析进行对比。两组之间数据的比较使用两独立样本t检验。采用双侧检验，有统计学意义的用P＜0.05表达。 结果： 1.MKP-1腺相关病毒转染效果 （1）过表达组大鼠海马组织内MKP-1mRNA的表达和蛋白质检测水平明显高于空载体组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。 （2）过表达组和空载体组在海马区都可见携带有绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的腺相关病毒的荧光表达。 2.行为学评估 各组大鼠第六周行为学检测结果：与正常组比较，过表达组、CUMS组行为学差异均有统计学意义(P＜0.05)。与空载体组比较，过表达组、CUMS组行为学差异均有统计学意义(P＜0.05)。 3.免疫印迹结果 （1）MKP-1表达水平：与正常组大鼠相比，CUMS组大鼠海马区MKP-1蛋白表达显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 （2）p-ERK/ERK表达水平：与正常组大鼠相比，CUMS组、过表达组大鼠海马区p-ERK/ERK蛋白表达显著下降(P＜0.05)；与空载体组大鼠相比，CUMS组、过表达组大鼠海马区p-ERK/ERK蛋白表达显著下降(P＜0.05)。 4.小胶质细胞标记物Iba-1的形态变化 过表达组的大鼠和CUMS组的大鼠都可见海马区的小胶质细胞被激活，胞体增大，突起变短变粗等，形态转变为变形虫样。 5.炎性因子的表达 与正常组比较，过表达组、CUMS组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平的表达显著升高(P＜0.05)。与空载体组比较，过表达组、CUMS组IL-1β、IL-6mRNA水平的表达显著升高(P＜0.05)；与CUMS组比较，过表达组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平的表达显著升高(P＜0.05)；与正常组相比，空载体组TNF-αmRNA水平较正常组升高。 结论： 1.MKP-1可能是抑郁症发病的一个重要基因。 2.MAPK-ERK信号通路可能与抑郁症的病理发病机制有关。 3.过表达组和CUMS组大鼠可见海马区小胶质细胞异常活化及炎性因子的变化，可能是大鼠出现抑郁样行为学的重要因素。
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