摘要
黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)为茄科(Solanceae)枸杞属(Lycium L.)多年生灌木，主要分布在我国宁夏、新疆、西藏、青海、内蒙、甘肃等盐碱地、干旱地，属于典型的荒漠植物。其早期作为一种藏药收载于《本草晶珠》、《四部医典》等藏医药著作中，用于治疗心热病、心脏病、月经不调、停经、高血压、内分泌失调等病症。现代科学研究表明黑杲枸杞果实含花色苷、生物碱、多糖、必需脂肪酸、氨基酸、维生素C、生育酚等营养物质及活性成分，具有抗氧化，神经保护，抑菌消炎，降血糖，预防心血管疾病等生物活性。 黑果枸杞与传统红枸杞相比含有更丰富的花色苷类活性物质，近几年成为了研究者关注的热点。目前对黑果枸杞花色苷的研究还比较有限，因此本文主要从黑果枸杞花色苷的提取工艺优化、稳定性、分离纯化、结构鉴定、抗氧化及免疫活性方面对其进行了较为系统的研究。主要研究总结如下: 1.黑果枸杞花色苷的提取工艺优化和稳定性研无选择液料比、提取时间、乙醇浓度及提取温度4个因素进行单因素实验，确定RMS实验因素中心点。对实验数据进行回归分析，得到黑果枸杞花色苷的最优提取工艺为:液料比40mL/g、提取时间3.07h、乙醇浓度71.36％。考虑到实验操作的便利性，将最优提取条件修正为:液料比40mL/g、提取时间3.0h、乙醇浓度70％、提取温度45℃。对黑果枸杞花色苷稳定的研究表明:酸性条件、避光避热、溶液中含有Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+金属离子及葡萄糖能保护黑果枸杞花色苷的稳定性。 2.黑果枸杞花色苷的分离纯化及结构鉴定.本研究通过AB-8大孔树脂吸附解吸附，AKTA半制备型色谱分离纯化获得纯度较高(97％)的组分1，通过pH示差法并以C3G为标准品测量了1组分的花色苷含量为845.6+43.9mg C3G/100g DW。通过HPLC、HPLC-MS、NMR等检测方法对黑果枸杞花色苷纯化组分1进行了结构解析，结合质谱核磁实验数据和相关文献报道最终将组分1鉴定为矮牵牛素3-O-芸香糖（反式-香豆酰基）-5-O-葡萄糖苷。 3.黑果枸杞花色苷的生物活性研究.通过体外抗氧化化学实验验证黑果枸杞花色苷及纯化物1有较强的DPPH、超氧根阴离子、ABTS自由基清除能力及一定的总抗氧化能力。采用PC12大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化神经细胞模型证明化合物1在一定浓度范围内可以抑制H2O2诱导产生的自由基对神经细胞的氧化损伤，保护细胞膜完整性，减少LDH分泌，降低PC12由于细胞脂质过氧化反应而产生的MDA含量，增强SOD、CAT、GSH-Px细胞抗氧化酶活性，抑制细胞凋亡。通过建立小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)模型，研究发现黑果枸杞花色苷1对RAW264.7细胞具有免疫活性的调节作用:能显著提升RAW264.7细胞增殖能力，促进细胞中性红吞噬能力，提高细胞体内酸性磷酸酶(ASP)活性，刺激细胞体内免疫调节的NO分泌量。
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