摘要
目的：研究表明，NF-κB与肿瘤的发生、发展及侵袭转移密切相关，一般认为NF-κB主要起抗凋亡和促肿瘤作用，因此NF-κB被作为治疗靶点，其抑制剂被用于癌症治疗。然而，数以千计的NF-κB抑制剂却未能发挥预期的临床效果。随着研究的深入，人们发现NF-κB不同位点的磷酸化状态可表现出截然相反的功能。国外已有研究表明，NF-κB RelA/p65第536位丝氨酸位点磷酸化（p-p65Ser536）对结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌有抑制作用。本课题对p-p65Ser536在胃癌中的表达及作用进行研究。 方法：使用组织芯片结合免疫组织化学法（SP法）检测NF-κB p-p65Ser536在正常胃粘膜、癌旁组织及胃癌中的表达，并分析其表达的临床意义；Western blot检测胃癌细胞和永生化胃粘膜上皮细胞中的表达情况；使用间接免疫荧光染色法检测NF-κB p65Ser536的表达及观察其磷酸化入核情况；建立NF-κB p65第536位丝氨酸位点磷酸化与非磷酸化细胞模型，通过使用Transwell迁移、侵袭小室实验和划痕实验检测NF-κB p-p65Ser536对胃癌细胞迁移与侵袭能力的影响。 结果：1.组织芯片的免疫组化结果显示：NF-κBp-p65Ser536蛋白在胞浆胞核中均有表达，且在非胃癌组织中高表达，胃癌组织中的表达显著降低，两者阳性率分别为83.6%(107/128)和36.8%(71/193)，差异有统计学意义（P＜0.05）。此外，p-p65Ser536在胃癌中的阳性表达率随着分化程度依次下降，差异具有统计学意义。NF-kBp-p65Ser536的表达与胃癌患者性别、年龄、肿瘤大小无明显相关性，而与胃癌的病理分级、有无淋巴结转移及临床TNM分期相关（P＜0.05）。2.Western-blot结果显示：胃癌MGC-803和SGC-7901细胞中NF-κB p-p65Ser536蛋白表达水平较永生化胃粘膜上皮GES-1细胞显着下降（P＜0.05），且低分化胃癌MGC-803细胞p-p65Ser536的表达较中分化SGC-7901细胞明显减少（P＜0.05）。3.免疫荧光结果显示：两种胃癌细胞中p65Ser536磷酸化蛋白入核较永生化胃黏膜细胞明显减少。4.Transwell迁移、侵袭实验和划痕实验结果显示：NF-κB p-p65Ser536对胃癌细胞的迁移、侵袭能力可能有抑制作用。 结论：1.NF-κB p-p65Ser536蛋白在胃癌中的表达降低，其表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关。2.NF-κBp-p65Ser536可能抑制胃癌细胞的迁移与侵袭能力。
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