摘要
近些年，我国家禽养殖业稳步发展，作为畜牧业中的重要一环，家禽养殖已经成为部分地区农民的主要收入来源。家禽业养殖模式逐渐从散养转向集约化和规模化，在规模化养殖中家禽病毒性疾病的爆发往往造成巨大的损失，在引起家禽死亡率的病因中病毒所占比例达到36%，水禽则是很多病毒的携带者。干扰素是一种具有强大抗病毒、免疫调节等多功能生物活性的细胞因子，对病毒性疾病有很好的治疗和预防效果。本研究采用基因工程的手段制备了鸭的Ⅰ型（α）、Ⅱ型（γ）和Ⅲ型（λ）干扰素，期望对鸭（禽）类病毒性疾病预防和治疗提供帮助。 本研究首先对鸭α、γ、λ干扰素的基因序列进行设计优化，通过化学合成的方法获得基因序列，将鸭α、γ、λ干扰素基因构建到杆状病毒转移载体pVL1393的多克隆位点中，获得重组转移载体pVL1393-DuIFN-α、pVL1393-DuIFN-γ和pVL1393-DuIFN-λ，将重组转移载体与失活拯救型家蚕杆状病毒穿梭质粒reBmBac共转染BmN细胞，收集重组病毒rBmBac-DuIFN-α、rBmBac-DuIFN-γ、rBmBac-DuIFN-λ，用重组病毒感染家蚕幼虫并收获表达产物，并通过PCR、RT-PCR的方法证明了三种干扰素基因均重组到了家蚕杆状病毒基因组中，且随着病毒基因组在家蚕幼虫体内进行了复制和高效的转录。 其次，本研究利用CEF/VSV-GFP系统对蚕血淋巴中的鸭α、γ、λ干扰素进行了抗病毒活性检测，即采用微量细胞病变抑制法，在CEF细胞上检测蚕血淋巴中的鸭干扰素对VSV-GFP病毒增殖的抑制效果，抗病毒结果显示蚕血淋巴中表达的重组鸭α、γ、λ干扰素都具有较强的抗病毒活性，重组鸭α、γ、λ干扰素抗病毒效价分别为8.13×105U/mL、3.0×105U/mL、6.1×105U/mL。 最后通过空斑筛选对共转染病毒进行纯化，分别获得了高表达三种干扰素的病毒毒种，重组鸭α干扰素效价为（1.9±0.25）×106U/mL，重组鸭γ干扰素效价为（8.65±0.52）×105U/mL，重组鸭λ干扰素效价为（1.56±0.1）×106U/mL，与未经纯化的重组病毒相比，纯化后的最高表达量的毒株所表达的干扰素效价均有2~3倍的提高。 本研究利用家蚕杆状病毒表达系统对鸭的α、γ、λ干扰素进行了高效表达，经检测均由较强抗病毒活性。为廉价鸭（禽）用干扰素的生产奠定了基础，期待对鸭（禽类）病毒性疾病的防控和治疗有所帮助。
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