摘要
现在市场上的流感疫苗主要为灭活病毒疫苗、减毒活病毒疫苗和重组HA疫苗这三种。流感病毒减毒活疫苗一般通过滴鼻接种，诱导粘膜免疫和细胞免疫等免疫反应，达到和自然感染过程同等的效果。 本研究以本实验室前期选育出的Vero细胞冷适应株A/Yunnan/1/2005Vca作为母本株，通过对培养过程中各个物理化学因素的探究来对流感病毒在Vero细胞上增殖的条件进行优化筛选，通过测定病毒收获液的TCID50及血凝效价等方式作为病毒产量指标，测定病毒产量。在国内外，细胞工厂培养技术已经是非常成熟和普遍的体外大量培养细胞的技术。使用细胞工厂来放大细胞及病毒的生产规模，可以为大规模生产搭建桥梁。本研究使用优化的条件将流感病毒放大至细胞工厂，来提高生产效率。本研究通过对Vero细胞为基质培养的流感病毒冷适应株收获液先后进行离心澄清、超滤浓缩、核酸酶处理以及柱层析等下游纯化工艺，来达到降低杂质、浓缩病毒、分离病毒与杂质的目的。本研究通过对两种层析纯化工艺进行对比，最终确定了使用Benzonase核酸酶以及Sepharose 4 Fast Flow对流感病毒进行层析纯化的工艺。最终病毒纯化液中Vero细胞残余DNA、牛血清白蛋白含量、蛋白含量等杂质均小于药典规定值，满足Vero细胞为基质制备疫苗的质量要求。 综上所述，本课题解决了流感病毒在Vero细胞上产量较低的问题，并确定了Vero细胞作为基质培养流感减毒冷适应株的最佳培养条件，使用了两步纯化方法用于Vero细胞流感病毒纯化，病毒回收率高，制备的流感灭活疫苗安全有效。
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