摘要
本文分为以下两个部分进行探讨： 第一部分 广西和越南北部HIV-1分子流行病学研究 目的： 本研究的主要目的是通过同时收集两地艾滋病感染样本，分析当前两地HIV-1亚型的分布、基因变异和系统进化特征，以期了解广西和越南北部地区HIV-1的流行特征、基因变异和相互的传播关系。 方法： 2016年-2017年，通过方便抽样，在广西（崇左市、防城港市、百色市、南宁市和柳州市）和越南北部（广宁省、凉山省、高平省和河江省）收集进行抗病毒治疗的艾滋病感染者作为研究对象。通过调查问卷对研究对象进行流行病学调查，获得基本人口学资料和艾滋病感染相关行为、感染途径、感染时间、治疗情况和跨境行为等资料，并采集外周静脉血液10ml，分离外周血单核细胞(PBMCs),提取前病毒DNA，对HIV-1gag、pol和env C2V3基因片段进行Nest-PCR扩增，将阳性扩增产物测序，然后用Bioedit和MEGA软件对基因序列进行序列的比对和校正，将编辑好的HIV序列提交HIV database数据库进行亚型分析和重组分析，同时采用MEGA和Simplot等生物信息学软件进步一确定亚型、重组断点分析、基因变异特和系统进化分析。将序列提交到网站构建ML树。 结果： 1.样本收集和HIV-1基因扩增:共收集研究对象1000例，其中广西567例，越南北部433例。共获得613例研究对象的流行病学数据和基因序列，其中广西399例，越南北部214例。成功扩增的广西样本中，包括gag区序列200条、pol区序列399条、env区序列178条;成功扩增的越南北部样本中，包括gag区序列112条，pol区序列214条和env区序列140条。 2.亚型判定与分布:共判定亚型613例。广西样本中，CRF01_AE亚型234例，CRF08_BC亚型106例，CRF07_BC亚型54例，B(B')亚型1例，C亚型1例，未知重组型3例;越南北部获得CRF01_AE亚型214例; 3.亚型在传播途径中的分布:广西CRF01_AE、CRF08_BC和CRF07_BC在异性传播途径中所占比例分别为34.09％(136/399)，4.51％(18/399)和1％(4/399);在静脉注射毒品途径中所占的比例分别为21.8％(87/399)，19.8％(79/399)和11.3％(45/399);越南北部CRF01_AE亚型在异性传播和静脉吸毒传播途径中分别占比39.9％和47.7％。 4.广西和越南北部CRF01_AE的ML系统进化树分析:广西和越南北部的CRF01_AE毒株可分成5个进化簇，其中广西柳州的注射吸毒人群(injection drug users，IDUs)和少量异性性传播人群(heterogeneous sexual transmissions，HETs)聚集成簇1;广西崇左市和防城港市的HETs和少量的IDUs与越南北部的IDUs和HETs聚集成簇2;南宁的4条IDUs序列和防城港的1条HET聚集成簇3;广西少量的IDUs和HETs与越南的少量IDUs和HETs独立聚集成2个独立簇(VC1和VC2);越南北部的IDUs可能传播给广西崇左市和防城港市的部分HETs人群。 5.未知重组型分析结果:获得三株HIV-1未知重组型，重组模式为CRF01_AE/B(B')和CRF01_AE/B(B')/C。 6.基因离散率结果分析:广西CRF01_AE亚型的gag、pol和env区及其编码片段p24、p17、p51、p15和p31的基因离散率均大于越南北部同一片段序列的基因离散率(P＜0.01);广西和越南北部CRF01AE亚型的env区离散率大于pol区，gag区的基因离散率小于pol区，差异统计学意义(P＜0.05);gag区的p17区段基因离散率高于p24;pol区各个片段的基因离散率由高到低依次是p51、p15和p31;根据env区的基因离散率来估计CRF01_AE亚型在广西大规模的流行时间大约为15～17年，在越南北部的大规模流行时间大约为9-11年。 7.广西CRF07_BC重组毒株Gag p6蛋白缺失分析结果显示，广西3例CRF07_BC重组毒株出现PIDKELY7个氨基酸缺失，即P6△7缺失。 结论： 1.广西和越南北部的HIV-1感染者以异性性接触和注射吸毒为主要传播途径。广西主要流行亚型为CRF01_AE、CRF08_BC和CRF07_BC亚型;越南北部主要流行CRF01_AE亚型; 2.越南北部IDUs的HIV-1可能传播给广西边境市的HETs人群，广西HETs与越南IDUs和HETs存在HIV-1的传播关系; 3.广西存在HIV-1CRF01_AE和CRF07/08_BC亚型重组的未知重组亚型。 第二部分 广西和越南北部HIV-1耐药及其影响因素研究 目的： 本研究的主要目的是通过同时收集两地艾滋病抗病毒治疗样本，研究广西和越南北部HIV/AIDS患者的耐药发生率、耐药突变类型、耐药药物种类、耐药人群分布等耐药差异特点，同时，分析广西和越南边境HIV-1耐药性发生的影响因素，为广西和越南边境监测HIV-1耐药株的流行及制定合理的抗病毒治疗方案提供科学依据。 方法： 将本研究第一部分获得的613份pol区DNA序列提交至斯坦福大学的HIV Drug Resistance Database数据库，获得各条序列耐药突变位点，耐药突变类型、耐药药物种类、及其耐药性分值。用Spss23.0统计软件进行描述性统计分析，均数比较用t检验和方差分析;耐药率的比较用卡方检验或Fisher确切概率法，影响因素分析用Logistic回归分析。 结果： 1.有效扩增并成功测序了613条pol区序列，包括广西399条，其中耐药率为11.53％(46/399);越南214条，耐药率为9.81％(21/214)。广西与越南北部耐药率差异不具有统计学意义(x2=0.421，p=0.516)。 2.广西不同城市之间的耐药率没有显著性差异(x2=1.48，p=0.0.915);越南北部不同省份之间的耐药率没有显著性差异（x2=6.4，p=0.0.94）。 3.广西和越南北部在低、中、高度耐药之间没有统计学差异。中国和越南均发生了高度耐药，分别占7.5％(30/399)和7.9％(21/214)。 4.广西CRF01_AE亚型耐药率为11.4％，CRF07_BC亚型耐药率为12.96％，CRF08_BC亚型耐药率为11.32％。越南北部所有样本均为CRF01_AE亚型，耐药率是9.81％;广西与越南北部的CRF01_AE亚型耐药率不具有统计学差异(x2=0.201，p=0.654)。 5.广西HIV-1毒株对NNRTIs的耐药率为5.76％，高于越南北部对NNRTIs的耐药率1.87％，差异有统计学意义(x2=5.019，p=0.025)。在所有耐药病例中，广西对NNRTIs类药物耐药构成比(50％)高于越南北部对NNRTIs类药物耐药构成比(19.05％)，差异有统计学意义(x2=6.09，p=0.014);广西双重耐药（NRTIs+NNRTIs）的构成比(32.61％)低于越南双重耐药构成比(66.6％)，差异具有统计学意义(x2=6.459，p=0.011)。 6.广西HIV-1/AIDS患者中对NRTIs，NNRTIs和PIs类药物耐药率分别为1％，5.76％和1％，对NRTIs+NNRTIs双重耐药率为3.76％(15/399)。 7.越南HIV-1/AIDS患者中对NRTIs，NNRTIs和PIs类药物耐药率分别为0.93％，1.87％和0.47％，对NRTIs+NNRTIs双重耐药率为6.54％(14/214)。 8.广西HIV-1/AIDS患者NRTIs耐药突变主要是M184V突变;NNRTIs耐药突变包括K103N，M230I/L，G190A/E，E138A/K突变;PIs耐药突变主要是I54L和V82V/F突变。 9.越南HIV-1/AIDS患者NRTIs耐药突变主要是M184V/I，V75M和K65R突变位点;NNRTIs耐药突变包括Y181C，G190A/R/S和K103N突变;PIs耐药突变包括N88S，L89V,L90M和L10F/I突变。 10.广西和越南北部发生在181位点和65位点的突变具有显著性差异(x2=8.514，p=0.004和x2=5.940，p=0.015)。 结论： 1.广西和越南北部的总体耐药率较低。广西主要对NRTIs类药物耐药，而越南主要发生NRTIs+NNRTIs双重耐药。两地区对PIs类药物耐药很少。 2.广西和越南北部对NRTIs主要产生M184V/I突变，对NNRTIs主要发生K103N和G190A/E突变，对PIs产生的耐药突变位点不同。 3.广西的耐药患者主要对3TC、ABC、FTC、EFV和NVP产生耐药，而越南的耐药患者主要对3TC、ABC、D4T、FTC、TDF、EFV和NVP产生耐药。 4.年龄和服药方案含有EFV和LPVr的治疗方案是中越边境耐药发生的影响因素。
NETL