摘要
目的：体外研究二甲双胍（Metformin，Met）联合培美曲塞（Pemetrexed，Pem）对人肺腺癌A549细胞株的增殖、凋亡及Mcl-1、Noxa表达的影响。并进一步探究二甲双胍联合培美曲塞抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导凋亡可能的机制。 方法：（1）不同浓度二甲双胍（0、2.5、5、10、20、40mmol/L）、培美曲塞（0、0.5、1、2、4、8μmol/L）48h下处理A549细胞，CCK-8法检测细胞增殖率，并由此确定二甲双胍的半数抑制浓度（8.759mmol/L）及培美曲塞的半数抑制浓度（1.426μmol/L），用于后续实验；（2）二甲双胍（IC50）及培美曲塞（IC50）单用或联用，于不同时间（24h，36h，48h）下处理A549细胞，CCK-8法检测细胞增殖抑制率；（3）流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布；（4）Western blot检测Mcl-1及Noxa蛋白表达情况；（5）运用直线相关分析，分析Mcl-1、Noxa的相关性。 结果：（1）CCK-8法检测不同浓度二甲双胍及培美曲塞作用于A549细胞，发现随二甲双胍及培美曲塞药物浓度的升高，人肺腺癌A549细胞的细胞增殖抑制率逐渐升高，呈剂量依赖性（P＜0.05），差异具有统计学意义；（2）CCK-8法检测各组药物作用于A549细胞，发现Met+Pem组作用于A549细胞的增殖抑制率优于单药组（P＜0.05），呈时间依赖性（P＜0.05），差异具有统计学意义；（3）使用流式细胞仪检测各组药物的细胞凋亡率，发现Met+Pem组作用A549细胞的凋亡率（30.60±0.36%）优于Met组凋亡率（13.32±0.32%）、Pem组凋亡率（12.90±0.13%）（P＜0.05），差异具有统计学意义；（4）流式细胞检测仪各组药物细胞周期分布，发现Met+Pem组（81.60±0.64%）G0/G1期细胞所占百分比较Met组（66.22±0.54%）及Pem组（63.96±1.33%）更高（P＜0.05），差异具有统计学意义；（5）Western Blot法检测示：二甲双胍（8.759mmol/L）作用A549细胞后，可引起Noxa（0.309±0.041）蛋白表达的上调，Mcl-1（0.213±0.029）蛋白表达的下调；培美曲塞（1.426μmol/L）作用A549细胞后，引起Noxa（0.283±0.068）蛋白表达的上调，Mcl-1（0.349±0.027）蛋白表达的下调，而两药联合作用A549细胞后，引起Noxa（0.569±0.042）蛋白表达的上调，Mcl-1（0.087±0.007）蛋白表达的下调，其表达水平较单药组有显著差异（P＜0.05），差异具有统计学意义；（6）Noxa的表达水平与Mcl-1表达水平呈负相关（P＜0.01）。 结论：（1）二甲双胍及培美曲塞在一定浓度范围均能抑制肺癌A549细胞的增殖，两药联合抑制肺癌A549细胞的增殖能力优于单药。（2）二甲双胍及培美曲塞能诱导肺癌A549细胞凋亡，两药联合诱导肺癌A549细胞的凋亡能力优于单药。（3）二甲双胍联合培美曲塞作用于肺癌A549细胞的增殖、凋亡的影响可能与其下调Mcl-1蛋白，上调Noxa蛋白的表达相关。
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