摘要
仙茅为石蒜科植物仙茅Curculigo orchioidesGaertn的根茎，具有补肾助阳、益精血、强筋骨的作用，主要用于肾阳不足、虚痨内伤和筋骨疼痛等病症。仙茅多糖能激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子。研究表明多糖是通过其特异性寡聚糖片段与受体结合从而介导免疫反应的。将仙茅多糖降解成适宜的、低分子量的寡糖片段，不仅对探讨仙茅多糖功能效应及作用机制有着重要意义，还能使多糖结构更为清晰。课题组前期对仙茅多糖酶解产物进行初步的体外免疫活性筛选，得到具有免疫活性的酶解混合物。本论文对具有免疫活性的仙茅多糖酶解产物进行分离纯化，得到具有活性的寡糖组分，主要结果如下： 1.利用DEAE-纤维素和Sephadex G-50凝胶柱层析对仙茅粗多糖进行分离纯化，得到仙茅纯多糖X-2，糖含量为84%。HP LC-PMP法测定X-2单糖组成由Man和Glc组成，摩尔比为Man∶Glc=17∶1。 2.仙茅纯多糖X-2用葡聚糖酶：酶添加量50%、温度为52℃、时间5h、pH6.0的条件下进行酶解，脱盐后用Sephadex LH-20凝胶柱层析分离纯化，主要得到XP1～XP5五个组分。X-2酶解混合物、XP4、XP3单糖组成均为Man和Glc，摩尔比分别为：Man∶Glc=9∶1、2∶1、6:1。质谱、甲基化及GC-MS、1D和2D NMR分析，表明XP5为单糖、XP4结构为[α-Glc-(1→6)-α-Man]的二糖、XP3结构为[α-Man-(1→4)-α-Glc-(1→6)-α-Man]的三糖。原子力显微镜（AFM）观测到X-2是无规则排列的细丝状的分型结构的单分子链，与X-2相比，其酶解产物，各聚合物链分子间未互相缠绕，呈现团状的细丝分型结构，也是无规则、多分枝的单分子链。 3.仙茅纯多糖X-2、酶解混合物XP，寡糖XP1～XP5进行体外免疫活性分析，通过刺激巨噬细胞分泌细胞因子TN F-α、IL-1、I L-2的结果可知。X-2、酶解混合物XP以及寡糖XP1～XP5均能显著诱导巨噬细胞分泌TNF-α，并存在剂量依赖关系，寡糖的诱导能力均低于X-2，其中高、中剂量多数呈现极显著性差异。X-2及其酶解产物均能刺激巨噬细RAW264.7分泌白细胞介素I L-1和I L-2，其中寡糖XP3的高剂量组呈现显著性差异，并且XP3诱导巨噬细胞分泌IL-1能力高于X-2。综合分析，发现寡糖XP3的免疫活性较好。
NETL