摘要
胚胎期以及刚出壳的雏鸡处于其生命最脆弱的时期，该阶段发育还不完善，抵抗力较差，容易受到外界各种因素影响而导致疾病发生，造成孵化率低、健雏率低，对孵化场和种鸡场的经济效益产生很大影响。因此，调查研究目前导致雏鸡胚胎病的主要病原菌的种类，对雏鸡胚胎病和提高雏鸡的成活率具有重要的意义。 1、为调查病、弱感染雏鸡胚胎的主要病原菌，采集了90只刚出壳的病、弱雏鸡。解剖观察其病理变化，从肝脏分离细菌，观察细菌的菌落菌体形态，提取分离菌株的DNA、进行16SrDNA基因序列的扩增并测序，再将测序结果与GenBank数据库的标准株序列比对，最终将比对结果与菌落菌体形态相结合，对分离菌株进行鉴定。结果发现病、弱雏鸡腹围较大;解剖发现皮下胶冻样，卵黄吸收不良，肝呈土黄色;显微镜下显示肝充血，脂肪变性。从病、弱雏鸡的肝脏分离出菌株56株，分离率为62.2％(56/90)。其中粪肠球菌分离率为46.4％(26/56)，大肠杆菌为16.1％(9/56)，金色葡萄球菌为14.3％(8/56)，奇异变形杆菌为8.9％(5/56)，鲍氏不动杆菌为5.3％(3/56)，沼泽考克氏菌为3.6％(2/56)，柠檬酸细菌属为1.8％(1/56)，无色杆菌为1.8％(1/56)，地衣芽胞杆菌为1.8％(1/56)。结果提示刚出壳雏鸡感染的细菌有9种，主要有粪肠球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，为雏鸡胚胎细菌感染的防治奠定了基础。 2、为探究粪肠球菌毒力的大小及耐药性，本试验测定了粪肠球菌对鸡胚的半数致死量，并对粪肠球菌做了8类抗生素15种药物的药敏试验。结果发现10倍系列浓度梯度粪肠球菌液，尿囊绒毛膜接种后，鸡胚的存活时间和死亡率呈明显的剂量依赖，粪肠球菌对鸡胚半数致死量为3.03×103cfu/mL;药敏试验发现鸡源粪肠球菌对头孢类药物有较强的耐药性，对青霉素和万古霉素较敏感。成功建立了粪肠球菌鸡胚毒力模型，同时筛选出粪肠球菌有效药物。 3、为建立一种快速检测鸡源粪肠球菌的方法，参照GenBank中已发表的鸡粪肠球菌全基因组，采用Primer Express5.0软件设计了一对特异引物，进行了敏感性、特异性、重复性试验，并通过临床组织样品检测评价其临床实用性。结果显示所建立的方法标准曲线线性关系良好，相关系数R2=0.955;该方法灵敏度高，可检测粪肠球菌的最低限度可达101cfu/mk;特异性强，不与其他鸡源致病菌发生交叉反应;重复性试验中变异系数小于5％，比较稳定。将患雏肝脏组织块提取的DNA作模板，经建立的SYBR GreenⅠLC-PCR方法检测，结果出现了特异性扩增曲线。此方法可用于临床上粪肠球菌的检测。
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