摘要
中华乌塘鳢（Bostrychus sinensis）是中国福建、广东、广西等地区重要的海水经济鱼类，随着集约式养殖的密度增大，中华乌塘鳢养殖场病害频发，中华乌塘鳢养殖业也因此遭受了巨大的经济损失。鱼类抵御微生物病原体的第一道有效防线是先天免疫系统，它可以通过一系列的模式识别受体(PRR)特异性的识别微生物病原体一系列不同的特征分子“病原体相关分子模式”(PAMPs)，并诱导炎症细胞因子和Ⅰ型干扰素等的释放，应对微生物病原体的攻击。Toll样受体（TLR）是一类至关重要的PRR，属于Ⅰ型跨膜受体。为深入了解中华乌塘鳢的免疫系统以及TLR信号通路的作用机制，本研究克隆了中华乌塘鳢TLR信号通路中的五个重要基因:TLR1(BsTLR1)、TLR2(BsTLR2)、TLR5(BsTLR5)、MyD88（BsMyD88）及TIRAP(BsTIRAP)，并对这些基因进行了生物信息学的分析。为进一步了解这些基因在先天免疫中的作用，通过实时荧光定量技术分析了其在健康鱼体组织中的表达模式，以及在副溶血弧菌和Poly I∶C刺激后的表达模式。具体研究结果如下: (1)BsTLR1、BsTLR2、BsTLR5、BsMyD88以及BsTIRAP基因的cDNA全长分别为2385、2448、2646、867和648bp，分别编码794、815、881、288和215个氨基酸。三个TLR基因都具有典型的TLR蛋白结构域:包含LRR(Leucine-rich repeat)、LRRCT(Leucine-rich repeat C-terminal)、跨膜区和TIR(Tol1-IL1-resistance)结构域。BsMyD88包含一个死亡结构域和一个TIR结构域。Bs TIRAP包含一个TIR结构域。多重序列比对结果显示，BsTLR1、BsTLR2、BsTLR5、BsMyD88以及Bs TIRAP氨基酸序列与其他鱼类的相似性更高。系统进化树也显示，五个基因在进化关系上与鱼类更为接近，与其它脊椎动物有一定的遗传距离。 (2)组织分布表达结果显示，BsTLR1、BsTLR2、Bs TLR5、BsMyD88以及BsTIRAP在检测组织中均有表达，并且在免疫组织中具有较高表达水平。BsTLR1在头肾和脾脏中表达较高，在肠道中表达最低;BsTLR2在脾脏和头肾中表达较高，在肌肉中表达最低;BsTLR5在肝脏和头肾中表达较高，在皮肤中表达最低。BsMyD88在肝脏和头肾中表达较高，在肠道中表达最低;BsTIRAP在血液和脾脏中表达较高，在肌肉中表达最低。 (3)经副溶血性弧菌(Vibrio Parahemolyticus)和Poly I∶C刺激后，BsTLR1、BsTLR2、BsTLR5、BsMyD88以及BsTIRAP在外周血液、头肾、肝脏及脾脏中的表达都显著上调，但是表达模式有所差异。表明BsTLR1、BsTLR2、BsTLR5、BsMyD88以及BsTIRAP都参与副溶血性弧菌和Poly I∶C的免疫应答。
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