摘要
多肽作为一类优良的基因/药物载体，具有生物活性多样、免疫原性低、生物相容性好以及可控的自组装性能等多种优点，被广泛地应用于基因/药物的传输体系中，同时，一些从生物中提取出的特殊结构的多肽片段也可以作为治疗性分子，也逐渐应用于抗癌、抗菌等领域。将多肽作为基因或药物载体、或将其修饰在其他载体上，装载药物或基因形成纳米组装体，可以促进药物或基因的细胞内化，控制药物在肿瘤组织中的定点释放，提高基因转染效率，增强药物的治疗效果。近年来，利用多肽修饰介导的药物和基因的传递研究以及其在抗癌、抗菌等领域的研究备受专家学者关注。本论文从多肽的不同优势出发，研究了新型多肽在抗癌药物传输方面以及其作为治疗性分子在抗癌、抗菌领域的潜能。 第一部分是多肽的制备、纯化和检测。采用标准Fmoc固相多肽合成（SPPS）技术，在2-氯-三苯甲基氯树脂固相反应器中，合成了实验中需要的七条多肽链：抗菌肽FIGAIARLLSKIF(Kn2)、FIKRIARLLRKIF(Kn2-7)、CKn2、CKn2-7、CKn2-RGDS(AP1)、CKn2-7-RGDS(AP2)、全保护多肽Nap-FFY(t-Bu)E(OtBu)-OH，并利用Bruker400MHz核磁共振和LCQAdvantage型电喷雾质谱仪对合成的各种多肽链进行表征。通过双电荷峰计算，实际的NLS分子量与计算出的理论值一致。并用高效液相色谱（HPLC）检测每条多肽链的纯度。 第二部分在抗菌肽BmKn2及其突变体BmKn2-7的基础上，在多肽的N端添加一个半胱氨酸，并利用Au-S配位键，构建多肽修饰的纳米金颗粒（AuNP@Kn2和AuNP@Kn2-7）。基于实验设计，我们完成了Kn2、Kn2-7、CKn2、CKn2-7、CKn2-RGDS(AP1)、CKn2-7-RGDS(AP2)的设计和合成。我们利用柠檬酸钠法在可控状态下将氯金酸还原成粒径在约为18nm的纳米金颗粒。并将源于蝎毒液的毒素多肽BmKn2-7修饰纳米金，并进一步研究其毒性，我们成功制备了多肽Kn2-7修饰的纳米金载体（AuNP@Kn2-7），粒径为34nm，相比较于多肽载体Kn2-7而言，具有较低的细胞毒性；另外，我们成功制备了Kn2-7-RGDS修饰的纳米金载体（AuNP@Kn2-7-RGDS），粒径为96nm。经研究发现，Kn2-7-RGDS修饰的纳米金载体（AuNP@Kn2-7-RGDS）具有一定的肿瘤细胞抑制效果。 第三部分制备含有多肽Nap-FFYE-CO-NH-(CH2)2-SS-MP抗肿瘤6-MP前体药物。由于该多肽片段Nap-FFYE-OH具有优良的自组装性能，通过透射电子显微镜（TEM）观测到，该6-MP前体药物Nap-FFYE-CO-NH-(CH2)2-SS-MP可以在中性水溶液中发生自组装，进而形成直径为50nm左右的纳米纤维。体外药物释放实验结果显示，在不含谷胱甘肽（GSH）的条件下，6-MP前体药物中的6-MP没有显示出任何释放，但是在模拟肿瘤环境条件下，控制GSH浓度为40mM，二硫键发生断裂，体外释药曲线显示出明显的GSH敏感性，24h后的累计药物释放效率几乎达到了75%。同时体外细胞毒性实验结果也证明，6-MP前体药物比游离的6-MP具有更低的细胞毒性。因此，这种含二硫键的还原敏感性6-MP前体药物，有望能够改善抗癌药物6-巯基嘌呤稳定性能差，细胞毒副作用大的缺陷，并且进一步实现肿瘤部位的响应性药物释放，使得抗肿瘤药物6-巯基嘌呤富集于肿瘤细胞，因而在癌症的临床治疗上有一定的应用潜能。
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