摘要
目的：观察黄芪多糖对化疗后大鼠脾脏T淋巴细胞凋亡率、自噬相关分子mRNA及蛋白表达的影响，并初步探讨黄芪多糖可能的作用机制。 方法：取6-8周龄SD大鼠，分离脾脏T淋巴细胞，分别采用（1）空白对照组;（2）625μg/ml的黄芪多糖；（3）40μM的顺铂；（4）40μM顺铂加625μg/ml的黄芪多糖处理12h和24h。流式细胞术双染AnnexinV-FITC和PropidiumIodide(PI)检测细胞凋亡变化。收集细胞提取总RNA和蛋白，采用荧光定量PCR检测mTOR、ClassIPI3K、ClassIIIPI3K、Atg5、Beclin1的mRNA表达量，WesternBot检测mTOR、ClassIPI3K、ClassIIIPI3K、Atg5、Beclin1、LC3和Caspase-3的蛋白表达变化。 结果：分离得到CD3+T淋巴细胞占总细胞比例为67.9%，其中CD3+CD4+T淋巴细胞比例为27.9%，CD3+CD8+T淋巴细胞比例为64.2%，大鼠脾脏T淋巴细胞在顺铂处理12h，24h后自噬相关基因mTOR、ClassIPI3K、ClassIIIPI3K、Atg5、Beclin1的mRNA[mTOR：(1.95±0.12)、（3.45±0.26）；ClassIPI3K：（2.55±0.13）、（2.41±0.15）；ClassIIIPI3K：（3.21±0.18）、（3.56±0.23）；Atg5：（1.35±0.05）、（2.95±0.24）；Beclin1：（1.75±0.08）、（2.86±0.19]较空白对照组[1.00±0.00、1.00±0.00]明显上升（P<0.05），同时Atg5、Beclin1、LC3和Caspase-3的蛋白表达上升，mTOR、ClassIPI3K、ClassIIIPI3K蛋白表达下降。而顺铂黄芪多糖组处理12h，24h后自噬相关基因的mRNA[mTOR：(1.43±0.08)、（1.67±0.11）；ClassIPI3K：（1.78±0.15）、（2.14±0.25）；ClassIIIPI3K：（2.56±0.13）、（3.08±0.19）；Atg5：（1.16±0.04）、（1.38±0.06）；Beclin1：（1.35±0.07）、（1.85±0.15）]较顺铂组[mTOR：(1.95±0.12)、（3.45±0.26）；ClassIPI3K：（2.55±0.13）、（2.41±0.15）；ClassIIIPI3K：（3.21±0.18）、（3.56±0.23）；Atg5：（1.35±0.05）、（2.95±0.24）；Beclin1：（1.75±0.08）、（2.86±0.19）]明显下降（P<0.05），且抑制Atg5、Beclin1、LC3和Caspase-3蛋白的表达，同时mTOR、ClassIPI3K、ClassIIIPI3K蛋白表达上升，流式细胞检测发现顺铂组双阳性凋亡细胞比例为15.8%，正常对照组为5.55%，黄芪多糖组为8.77%，顺铂黄芪多糖组为11.2%，提示黄芪多糖能够抑制顺铂导致的T淋巴细胞凋亡。 结论：黄芪多糖干预化疗后大鼠脾脏T淋巴细胞，T细胞凋亡率下降，自噬相关分子的mRNA及蛋白表达下降，这提示黄芪多糖能抑制化疗后T细胞凋亡，它的机制可能是通过抑制过高的自噬水平实现的。
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