摘要
蔷薇科李属植物光核桃Prunus mira Koehne，又名（康布、呷木、握侃[1]、康康）、毛桃，是国内外罕见的桃种质资源“活化石群”，分布极广、蕴藏量大，产四川、云南和西藏等地[2]，因果核壳相对光滑故名“光核”桃；种仁入药，即桃仁。《四川省中药材标准》(1992版)[3]功能沿用中医的活血祛瘀、润肠通便，质量控制水平较低。而藏医经典著作《晶珠本草》[4]（1745年）记载“种子榨取的油涂擦治头发、眉毛、胡子等脱落症”，但该临床经验尚未推广。 目的： 1. 分析光核桃仁油中脂溶性化学成分，发现特有化合物。 2. 测定光核桃油仁中化学成分含量，提高质量控制水平。 3. 揭示光核桃仁油促进毛发生长的量效关系及其作用机制。 方法： 1. 热榨法榨取光核桃仁油，采用GC-MS法分离、鉴定，并测定各个化合物相对含有量，对结果进行聚类分析和主成分分析。 2. 采用HPLC法，在38℃柱温、1.0 mL/min流速、210 nm波长下，以甲醇：乙腈：水为流动相进行等度洗脱，测定14个批次光核桃仁油中化学成分的含量。 3. 利用硫化钠和脱毛膏两种造模方法制备小鼠脱毛模型，同时于小鼠脱毛部位涂抹光核桃仁油（8个剂量），连续给药7d，以新生毛发生长状况评分、新生毛发长度和新生毛发重量为指标进行量效关系研究，初步探索光核桃仁油促进毛发生长的有效剂量范围。 4. 利用硫化钠致C57BL/6小鼠脱毛模型，同时给脱毛部位小鼠涂抹光核桃仁油，连续21d，以毛发生长状况评分、毛发长度、毛发生长速率、毛发重量、毛囊数量以及真皮厚度为指标，评价光核桃仁油促进毛发生长的有效性。采用RT-PCR和WB测定光核桃仁油对皮肤中Wnt10b、GSK-3β和β-catenin mRNA和蛋白表达的影响。 结果： 1．应用GC-MS，鉴定出光核桃仁油脂溶性成分中41个化合物，以油酸、β-谷甾醇、反式角鲨烯、γ-生育酚、维生素 E为主，特有化合物5个（4-甲基壬烷、1,2,4-三甲基环己烷、反式-2,4-癸二烯醛、二十八醛和2,4-癸二烯醛）。 2．应用HPLC，对光核桃仁油中α-生育酚、维生素 E以及β-谷甾醇3个化学成分的精密度、重复性、稳定性及加样回收率考察结果均符合要求，RSD值均小于3%，其线性范围分别为72.00~1256.00 μg·mL-1、7.60~187.00μg·mL-1、100.00~904.00 μg·mL-1，在此范围内各成分线性关系良好。 3．量效关系研究表明，光核桃仁油原液、光核桃仁油稀释2和4倍（剂量在15.06~60.26mg药材/cm2/d）能明显增加小鼠新生毛发生长状况评分、毛发长度和毛发重量，具有促进小鼠毛发生长的作用，且剂量与作用呈正相关，但剂量在0.47~7.53mg药材/cm2/d的光核桃仁油对小鼠毛发没有促进生长作用。 4. 在涂抹光核桃仁油期间，C57BL/6小鼠皮肤变黑时间有变短趋势、毛发长度、毛发生长速率、毛发重量、毛囊数量和真皮厚度均明显增加。稀释2倍剂量（30.13mg药材/cm2/d）能提高小鼠皮肤中Wnt10b和β-catenin的mRNA表达，对Gsk-3β的mRNA表达亦有增加的趋势；同时能提高小鼠皮肤中Gsk-3β和β-catenin蛋白的表达，对小鼠皮肤中Wnt10b的蛋白表达亦有增加的趋势。 结论： 1. 光核桃仁油中脂溶性成分和特有化合物的鉴定，为光核桃仁油的质量控制以及药效物质基础研究提供参考。 2. 建立了光核桃仁油中3种化学成分的HPLC含量测定方法，该方法操作简便、准确、重复性好，可用于提高光核桃仁油的质量控制。 3. 光核桃仁油剂量在15.06~60.26mg药材/cm2/d范围内具有促进脱毛小鼠模型毛发生长的作用。 4. 光核桃仁油具有促进小鼠毛发生长的作用，以30.13mg药材/cm2/d剂量相对较好，其机制可能与调控皮肤中Wnt/β-catenin信号通路有关。
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