摘要
目的：利用噬菌体随机七肽库体外筛选能与人膀胱癌 EJ 细胞特异性结合的小分子多肽，为膀胱癌的早期诊断和靶向治疗提供理论基础。 方法：以膀胱癌细胞系EJ为靶细胞，人正常膀胱移行上皮细胞为吸附细胞，对噬菌体随机七肽库进行3轮体外减性筛选；随机挑取30个阳性噬菌体克隆，用ELISA法鉴定其与EJ细胞结合的特异性；对阳性噬菌体克隆进行测序分析；采用固相化学合成法制备 EJ 细胞导向肽及其对照肽；通过 MTT 试验和细胞损伤修复实验研究该膀胱肿瘤导向肽对EJ细胞生长的影响。 结果： 1、经过3轮“筛选-扩增-再筛选”，与EJ细胞特异结合的噬菌体得到高度富集，回收率也增加了近200倍。 2、ELISA法鉴定结果显示，特异性结合系数≥2的阳性噬菌体克隆共有17个。 3、测序结果显示，其中R2、R5、R9、R12、R16、R17、R21、R24八个噬菌体克隆的序列均为AVEAAKT,该肽段重复率最高且无同源性。 4、制备了EJ细胞导向肽AVEAAKT及其对照肽，纯度达95%。 5、MTT 试验结果显示,该膀胱肿瘤导向肽及其对照肽的相对抑制率均低于30%，细胞损伤修复实验结果显示，单位时间内，各组细胞表现出相同的生长趋势，从而证实了该膀胱肿瘤导向肽对EJ细胞的生长几乎无影响。 结论： 本实验利用噬菌体展示技术体外筛选获得了能与人膀胱癌EJ细胞特异性结合的小分子多肽AVEAAKT，并证实了该多肽对EJ细胞的生长几乎无影响。经查该肽段与已知蛋白尚无同源性，因此它很有可能为膀胱癌的早期诊断和靶向治疗提供新的思路。
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