摘要
研究背景： 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, Hp）感染是引起胃炎、胃溃疡的主要诱因，且与胃癌的发生有着密切的关系。胃内酸性环境对抗幽门螺杆菌药物疗效的发挥是一种威胁，且传统制剂在胃内的滞留时间短暂，药物在幽门螺杆菌感染部位难以达到有效的治疗浓度，从而使根除幽门螺杆菌的效率并不理想。此外，传统的抗菌制剂对幽门螺杆菌的特异性低，易破坏肠道的菌群平衡。课题组前期以幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI为靶标，通过不同连接方式将脲基引入壳聚糖中，构建了脲基修饰的壳聚糖衍生物载体材料，并制备得到了具有幽门螺杆菌靶向性的Amoxicillin-UCCs-2/TPP纳米粒。体内外评价结果表明，该纳米粒具有靶向递送药物的 特 性 ， 且 表 现 出 良 好 的 生 物 相 容 性 和 抗 幽 门 螺 杆 菌 活 性 。但Amoxicillin-UCCs-2/TPP纳米粒存在较为严重的药物突释现象（pH1.2环境中2 h药物释放达到 40%），不利于药物的胃内递送和靶向作用的发挥。因此，研发更为有效的pH敏感型幽门螺杆菌靶向递药系统具有重要的意义，可为幽门螺杆菌的临床治疗提供理论和实验依据。 研究目的： 本论文以幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI 为靶标，采用脲基修饰壳聚糖衍生物 UCCs-2作为靶向材料，利用PLGA的缓控释特性，制备得到负载阿莫西林的pH敏感型幽门螺杆菌靶向纳米粒 AMX-PLGA/UCCs-2，通过对纳米粒处方的优化，筛选出具有良好pH敏感释药特性的幽门螺杆菌靶向的纳米递药系统。 方法： 首先，以阿莫西林为模型治疗药物，采用复乳化-溶剂挥发法制备核-壳结构的双层载药纳米粒 AMX-PLGA/UCCs-2。通过正交设计对纳米粒的处方进行优化，筛选得到pH敏感性优的纳米递药系统。对载药纳米粒进行表征并考察其pH敏感性及释药特性。 然后，采用测定细菌OD590值、细菌染色以及扫描电镜考察AMX-PLGA/UCCs-2纳米粒的体外抗菌活性；通过加入不同浓度的尿素来考察尿素通道蛋白底物尿素对载药纳米粒抗菌活性的影响；采用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞仪定性和定量考察尿素对幽门螺杆菌摄取荧光纳米粒的影响；通过 MTT 实验评价 PLGA/UCCs-2空白纳米粒的安全性。 最后，通过菌落计数、H&E染色和扫描电镜考察AMX-PLGA/UCCs-2纳米粒的体内抗菌活性；并评价设计制备的纳米粒的体内安全性及在小鼠胃内的滞留效应。 结果： 1、经处方优化后得到pH敏感性优的AMX-PLGA/UCCs-2纳米粒处方A1B2C2。实验结果表明，在模拟的胃酸性环境（pH 1.2）以及胃黏膜层中（pH 6.0），所得纳米粒具有比课题组前期制备的靶向纳米粒 Amoxicillin-UCCs-2/TPP 更低的药物突释，有利于药物的胃内递送和靶向作用的发挥。 2、体外抗幽门螺杆菌实验结果表明，脲基修饰的纳米粒AMX-PLGA/UCCs-2的体外抗菌活性呈现出时间依赖性；与未经脲基修饰的 AMX-PLGA/Cs 纳米粒相比，经脲基基团修饰的AMX-PLGA/UCCs-2纳米粒展示出更优的抗菌活性。随着尿素加入浓度的增加，AMX-PLGA/UCCs-2 纳米粒的抗菌活性逐渐被抑制。幽门螺杆菌对荧光标记纳米粒的摄取研究结果显示，尿素通道蛋白介导的纳米粒摄取能被尿素竞争性地抑制，而未经脲基修饰的纳米粒的摄取并未被影响。MTT 实验结果表明， PLGA/UCCs-2空白纳米粒具备良好的安全性。 3、体内抗幽门螺杆菌活性评价结果表明，AMX-PLGA/UCCs-2纳米粒展现出比阿莫西林游离药物和未经修饰的 AMX-PLGA/Cs 纳米粒更优的抗菌活性，与体外实验结果一致。体内安全性考察结果表明，AMX-PLGA/UCCs-2纳米粒具备优良的安全性；小鼠活体成像结果表明，设计制备的纳米粒能够在胃内滞留较长时间，为载药纳米粒到达幽门螺杆菌定植区域及靶向性治疗作用的发挥提供了条件。 结论: 本论文利用PLGA的缓控释特性和壳聚糖衍生物载体材料UCCs-2的UreI靶向性，制备得到具有核-壳结构的载阿莫西林纳米粒AMX-PLGA/UCCs-2。通过正交实验设计对纳米粒的处方进行了优化，筛选得到满足胃内递药需求的 pH 敏感性纳米粒。体内外活性研究结果表明，所得递药系统具有良好的安全性、pH敏感特性和靶向抗幽门螺杆菌活性。经过进一步的评价，有望为幽门螺杆菌感染的靶向治疗和临床应用提供理论和实验指导。
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